工作原理
人抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)elisa试剂盒实验原理
ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。
ELISA试剂盒常见问答案例
问:生物试剂和ELISA试剂盒的分别不同在哪?
答:ELISA试剂盒就是把该实验需要的试剂按一定用量和比例组合起来的成品。一般都是按做多少次的用量包装。
问:ELISA试剂盒为什么要用血清检测?如果用血清检测病毒,血清溶血的程度对检测结果影响程度有多大呢?
答:ELISA其实是可以测一些组织、细胞等样本的,但是由于组织、细胞是固体样本,要对其进行破碎,提取被检物质;而在提取被检物质时破碎方式(如机械破碎、超声破碎、裂解液裂解等)、提取液的成份等存在差异,导致提取程度有所差异,从而难以建立正常参考值;ELISA试剂盒而血清或血浆样本就不存在因提取过程导致的偏差并且采集时又非常方便,因此通常临床常采用血清、血浆做为检测对象。
样本制备及注意事项:
1.细胞培养上清:2000-3000转/分离心20分钟后取上清;
2.组织匀浆:切割标本后,称重,按1:9生理盐水匀浆,5000转/分离心3-5分钟后取上清;
3.血清:样本室温放置2小时或4℃过夜后取上清;
4.血浆:可用EDTA、枸橼酸钠或肝素作为抗凝剂(根据试剂盒要求选择),样本加入10%抗凝剂混合10-20分钟,2000-3000转/分离心20分钟后取上清;
5.尿液、胸水、腹水、脑积液等:2000-3000转/分离心20分钟后取上清。
注意事项
人抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)ELISA试剂盒操作注意事项
1)试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
2)实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
3)不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4)使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
5)使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6)洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7)底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8)加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9)按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
性能特点
人抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)ELISA试剂盒优点体现:
特异性高:进行了广泛的非特异性排查,避免了由于交叉反应和干扰导致的实验数据误差。
精度高:通过加标回收率和线性稀释实验,确保样本值的准确性,精确度高于同类产品(较低的CV%)。
重复性好:lot-to-lot检测确保Z小的批间差异。
可靠性强:经优化的试剂盒组分可有效的阻止假阳性和假阴性试验结果。
标准曲线:在保证JZ数据的前提下提供较宽的检测范围,以满足需求。
价格低廉:原装进口RD试剂,国内分装配置,大大减少了客户因为价格高而必须购买国产试剂盒的顾虑。
洗板方法1. 手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内,浸泡1-2分钟,根据需要,重复此过程数次。
2. 自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
使用方法
人抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)ELISA试剂盒交叉使用可辨真假
如果购买了两盒同一公司的ELISA试剂盒A和B,利用交叉实验即可辨别ELISA试剂盒是否造假,方法如下:
(1)取出购买的试剂盒A的包被板两条。
(2)一条包被板加试剂盒A的标准品做标准曲线。
(3)另一条包被板加试剂盒B的标准品做标准曲线。
(4)后续操作按照试剂盒说明书进行,加检测抗体、酶复合物和底物。
(5)实验完毕后,检测两条标准曲线,如果两条标准曲线一致则说明两个ELISA试剂盒检测的同一个指标而非A和B,即该试剂盒为伪劣假造ELISA试剂盒。
(6)如果两条标准曲线不一致则说明两个ELISA试剂盒检测的不同指标,试剂盒A只能检测A,不能检测B,即该试剂盒为正常的ELISA试剂盒。