pDrive Cloning Vector(参见pDrive Cloning Vector)通过UA杂交可对PCR产物进行GX克隆。载体是3'端带有U突出末端的线性形式,能与Taq和其他非高保真DNA聚合酶产生的带有A突出末端的PCR产物进行高特异性杂交。pDrive Cloning Vector具有很多有用的特征,便于对克隆的PCR产物进行分析。这些特征包括多种独特的限制性酶切识别位点、通用测序引物位点和用于体外转录的启动子。此外,载体还可进行氨苄青霉素和卡那霉素筛选,以及对重组克隆的蓝/白斑筛选。
PCR产物可GX克隆到pDrive Cloning Vector,与基于TA的克隆载体相比,所需时间更少(参见Highly specific cloning with a shorter ligation time of 30 min和Highly specific cloning with a ligation tme of 4 h)。而且,T是Z可能与非互补碱基(如G、C和T)杂交的碱基,带有T突出末端的载体更可能发生自连或连接克隆引物或退火引物,导致假阳性克隆数目增加。相比起来,pDrive Cloning Vector具有更高克隆效率,表明U对非特异性碱基配对有更低容忍度。
Ligation Master Mix采用预混形式,专用于为GX克隆提供的杂交环境。
使用QIAGEN EZ Competent Cells能让克隆步骤更加快速和方便。转化的细胞通常都需要在SOC培养基中孵育复苏,需要时间来表达抗性。与此不同,QIAGEN EZ Competent Cells不需要这个耗时的复苏孵育步骤即可GX转化(每微克DNA >108个菌落形成单位(CFU);参见Transformation without recovery incubation)。