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牛蛙生长激素(GH)elisa试剂盒 价格,牛蛙生长激素Elisa试剂盒 说明书
〖产品名称〗 | 牛蛙生长激素(GH) ELISA试剂盒 |
〖产品规格〗 | 96T/48T |
〖保存条件〗 | 2-8℃(经常使用时在冰箱中保鲜即可) 长期保存在-20℃低温下 |
〖产品有效期〗 | 半年(6个月) |
公司ELISA试剂盒涉及的动物种类试剂盒从两栖类、禽类、兽类直至人类本身,包括蛙、鸡、鸭、小鼠、大鼠、仓鼠、豚鼠、雪貂、猫、猪、牛、羊、马、鹿和人等,植物种类ELISA试剂盒有马铃薯ELISA试剂盒等
ELISA实验操作规程: 牛蛙生长激素(GH)ELISA试剂盒 价格,牛蛙生长激素Elisa试剂盒 说明书
1、要保证移液枪的准确性,误差不能超过2%。可用水和电子天平进行确定。但Z好有专业人员进行矫正 |
2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的液体后,要更换枪头。即使是吸取标准品时 |
3、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出,使各种试剂都恢复到室温,以使结果更稳定 |
4、实验时,要使底物避光保存 |
5、用枪吸取液体时速度不能太快,以免产生气泡而使吸取量不准确 |
6、吸取液体时,要用量程和需要量接近的枪去吸,减少误差 |
7、将液体加到酶标孔中时,避免枪头和孔内液体接触,可使枪头上的液滴和孔壁接触,液滴会自然流下去 |
8、液体全部加完后,可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒,混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能 |
9、温浴时,要用不干胶或胶带纸封好酶标板,防止水分的蒸发 |
10、洗板时,每次洗液加入后,应静置1分钟,使清洗更加彻底。没有洗板机时,倒去液体后,要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干 |
11、洗液不够时,可用蒸馏水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸缓冲液,加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存 |
12、底物是光敏感的,要在临用前现配 |
13、检测前,要打开酶标仪,使之稳定10分钟以上 |
14、底物有一定的毒性,终止液对皮肤有腐蚀性,应尽量避免接触 |
15、待检样品要澄清,否则会影响结果 |
16、温浴时间应遵守试剂盒规定 |
17、应尽量做双孔实验,这样才能保证数据的准确性 |
18、对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证 |
牛蛙生长激素(GH)ELISA试剂盒 价格,牛蛙生长激素Elisa试剂盒 说明书 ELISA试剂盒抗体保存:
一、保存温度和条件
对于很多抗体而言,保存在-20℃是完全足够了,没有任何证据显示保存在-80℃会有更多的好处!分装成小等份可程度减少由冻融造成的损伤,以及从单个试剂瓶中多次吸取而引入的污染。小等份只需冻融一次,如有剩余,可将剩余物保存于 4oC. 在收到抗体时,在 10''000 × g 下离心 20 秒以沉积截留于试剂瓶螺纹的溶液,并以小等份转移至低蛋白结合微量离心管中。小等份的量取决于实验人员在实验中通常采用的量。小等份应不小于10 µl; 等份越小,储液浓度因抗体蒸发及吸附于保存瓶表面而受到的影响越大。
在大多数情况下,收到抗体时在 4oC 下保存一至两周,然后再冷冻进行长期保存是可接受的,但也许腹水液是例外,它可能包含蛋白酶,因而应该尽快冻存。同样,遵照说明书上的建议是重要的。
大部分抗体的运输条件:一般的运输过程需要1-2周的时间,所以是在4℃的条件下来完成的。
对于特殊的抗体,如酶、荧光素等偶联抗体、IgG3同型抗体等抗体的保存有其注意事项:
1、偶联抗体 酶偶联抗体不应冻存,而应保存于 4oC. 冻融不仅影响抗体结合能力,还会降低酶活性。无论偶联至荧光染料、酶还是生物素,偶联抗体都应保存于深色试剂瓶中或用金属箔包裹. 暴露于光线中将损害偶联物的活性。特别是荧光偶联物易受到光漂白影响,在实验的所有阶段都应避光。
2、IgG3的同型对照 保存在4℃,避免冻起来。因为如果出现冻融过程,该抗体非常容易形成多聚体
二、用叠氮化钠防止污染
为了防止微生物污染,可将叠氮化钠加入抗体制备品中达到0.02% (w/v). 的终浓度。但是有时不能使用叠氮化钠,有以下两中情形:
(1)、如果用抗体染色或处理活细胞,或如果用抗体进行体内研究,一定要使用不包含叠氮化钠的制备品。该KJ剂也对大多数其它生物具有毒性:它阻断细胞色素电子传递系统。
(2)、叠氮化钠会干扰氨基参与的任何偶联,应在偶联进行前除去。偶联后,抗体可保存于叠氮化钠中,除此以外,0.01% 硫汞撒(硫柳汞)不含伯胺,也是可接受的替代物。
叠氮化钠可通过透析或凝胶过滤从抗体溶液中除去。IgG 的分子量为 150''000 道尔顿(IgM 为约 600''000);叠氮化钠的分子量为 65 道尔顿。截留分子量为 14''000 道尔顿的微透析装置可保留抗体同时使叠氮化物向外扩散。在保持于 4oC 的磁性搅拌器上的烧杯中,每毫升抗体使用至少一升冷 PBS 并搅拌透析装置 6 小时。更换 PBS 两次,每次更换搅拌至少 6 小时。如有可能,所有材料都应灭菌并且所得的制备物应无菌操作。
三、冷冻/融化损伤
重复冷冻/融化循环可使抗体变性,导致其形成使抗体结合能力降低的聚集物。保存于 -20oC 对于大多数抗体是适当的;保存于 -80oC 无明显优势。冰箱不能为无霜型。 这些冷冻和融化之间的循环(以减少结霜)恰恰是应该避免的。出于相同原因,抗体试剂瓶应置于具有Z小温度波动的冰箱区域,例如朝冰箱后部放置而不是置于门架上。
有些研究人员加入冷冻保护剂甘油达到 50% 的终浓度以防止冷冻/融化损伤;甘油可将凝固点降低至低于 -20oC。虽然这对于很多抗体是可接受的,但还是不能确保在该保存条件下的稳定性,通常我们参考具体产品说明书提供的保存方法。在这里,我们也一般不建议将包含甘油的溶液保存于 -80oC,因为该温度低于甘油的凝固点。还要注意甘油可被细菌污染。如果加入甘油或任何冷冻保护剂,则应当小心操作,以得到无菌制备物。
应避免抗体在稀释至工作浓度后在 4℃ 下保存超过一天。蛋白质在高浓度下保存时一般不易降解,理想的浓度为 1 mg/ml 或更高。这是在抗体溶液中加入蛋白质例如 BSA 作为稳定剂的理论基础。加入的蛋白质也有助于减少抗体因结合于容器壁上而造成的损失。对于打算进行偶联的抗体而言,由于稳定蛋白质会与抗体竞争,降低了偶联的效率,所以不应加入稳定蛋白质。
本实验技术涉及抗体(点击名称查看详细信息):
信号转导研究相关抗体
淋巴细胞信号通路相关抗体
神经生物学研究相关抗体
转录调节因子研究相关抗体
肿瘤/凋亡研究相关抗体
细胞周期研究相关抗体
实验条件的选择:
在ELISA试剂盒中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1)固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好 |
(2)包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18~24小时。蛋白质包被的Z适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值而蛋白量Z少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml |
(3)酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度 |
(4) 牛蛙生长激素(GH)ELISA试剂盒 价格,牛蛙生长激素Elisa试剂盒 说明书 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是双氧水在临用前加入。 |
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注:N代表ELISA试剂盒盒数,活动解释权归本公司所有!