人脂多糖/内毒素(LPS)ELISA Kit 公司/人脂多糖/内毒素Elisa人脂多糖/内毒素(LPS)ELISA试剂盒,昆明、大连、青岛、长春、南京、上海、北京、成都、重庆、长沙、武汉、广州、深圳、石河子、赤峰、天津热卖中......
人脂多糖/内毒素(LPS)ELISA Kit 公司/人脂多糖/内毒素Elisa
人脂多糖(LPS)酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用
特异性:本试剂盒可同时检测天然或重组的人脂多糖(LPS),且与其他相关物质无交叉反应。
有效期:6个月
预期应用:ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中脂多糖(LPS)含量。
人脂多糖/内毒素(LPS)ELISA Kit 公司/人脂多糖/内毒素Elisa
说明
1. 试剂盒保存:-20℃(较长时间不用时);2-8℃(频繁使用时)。
2. 浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。
3. 中、英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准。
4. 刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。
实验原理
用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗脂多糖(LPS)抗体的微孔中依次加入标本或标准品、HRP标记的脂多糖(LPS),经过彻底洗涤后用底物显色。底物在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成的黄色。颜色的深浅和样品中的脂多糖(LPS)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制
1. 酶联板(Assay plate ): 一块(96孔)。
2. 标准品(Standard): 5×1 ml/瓶。
标准品 S1 S2 S3 S4 S5
浓度
(μg/ml) 0.16 0.32 0.8 2.4 8
3. 酶结合物(HRP-Conjugate): 1×6ml/瓶。
4. 底物溶液A(Substrate A): 1×6ml/瓶。
5. 底物溶液B(Substrate B): 1×6ml/瓶。
6. 浓洗涤液(Wash Buffer): 1×15ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释20倍。
7. 终止液(Stop Solution): 1×6ml/瓶(2N H2SO4)。
需要而未提供的试剂和器材
1. 标准规格酶标仪
2. 高速离心机
3. 电热恒温培养箱
4. 干净的试管和Eppendof管
5. 系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,Z好用多通道移液器
6. 蒸馏水,容量瓶等
标本的采集及保存
1. 血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2. 血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000 g离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
3. 细胞培养物上清或其它生物标本:1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
注:标本溶血会影响检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
标本的稀释原则:
首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量,确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内,检测的结果才是准确的。稀释的过程中,应做好详细的记录。计算浓度时,稀释了“N”倍,标本的浓度应再乘以“N”。
人脂多糖/内毒素(LPS)ELISA Kit 公司/人脂多糖/内毒素Elisa
操作步骤
实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时,先进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。
1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔不加任何溶液。余孔分别加标准品或待测样品50μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。然后再各加入50μl酶结合物(空白孔不加)。
为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
2. 轻轻混匀,37℃温育60分钟。
3. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3-4次,每次浸泡1-2分钟,200μl/每孔,甩干。
4. 依序每孔加底物溶液A和B各50μl,37℃避光显色15分钟。
5. 依序每孔加终止溶液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。
6. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后15分钟以内进行检测。
实验备注
1. 用户在初次使用试剂盒时,应将各种试剂管离心数分钟,以便试剂集中到管底。
2. 每次实验留一孔作为空白调零孔,该孔不加任何试剂,只是加底物溶液及2N H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。
3. 为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜。
4. 建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。
洗板方法
手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。
自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
计算
以标准物的浓度为横坐标(对数坐标),OD值为纵坐标(普通坐标),在半对数坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
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注意事项
1. 本操作说明适用于48T试剂盒,但48T试剂盒所有试剂减半。
2. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓,避免起泡。
3. 洗涤过程非常重要,不充分的洗涤易造成假阳性。
4. 一次加样时间Z好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
5. 请每次测定的同时做标准曲线,Z好做复孔。
6. 如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请乘以稀释倍数。
7. 底物请避光保存。
8. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。
全国咨询热线:010 -56429247 13488645491 梁经理 在线客服 QQ:774226171