批发 超低分子量蛋白Marker II,超低分子量蛋白Marker II 说明书
超低分子量蛋白质Marker II（1.4-26.6kD）
Ultra Low Molecular Weight Protein Marker II
●产品编号及规格：
10T（100μl）
● 储存条件：
-20℃保存，开封后有效期12个月。
● 产品简介：
本产品包含2种多肽和4种低分子量蛋白质组成，可以用来判断 SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量。分子量范围为1.4kD-26.6kD，分子量大小为1.4kD，3.5kD，6.5kD，14.2kD，16.9kD，26.6kD。
● 使用说明：
1. 超低分子量多肽的蛋白电泳较常规的蛋白电泳更为复杂，请仔细参阅说明书后再进行操作。
2. 收到产品后，室温彻底融化混匀后，离心快甩将溶液收集到管底，根据需要适量分装，-20℃贮存，每次使用时取一管使用。
3. 本产品已经含有了样品缓冲液，使用前取一管分装好的Marker样品室温彻底融化后，95℃预热5分钟即可上样电泳，用考马斯亮蓝G-250染色后可见6条蛋白带。一般说来，0.75mm×5mm（厚度×宽度）的加样孔上样10μl，其他规格梳子请适当调整上样量。
注：如出现带型缺失现象或样品聚集在分离胶上沿，可在Marker中加入终浓度为50mM的DTT（如：20μl Marker中加入1M DTT 1μl），95℃处理5分钟后再上样。
4. 制胶：先配制分离胶，聚合后再配制浓缩胶。电泳时，80-100v跑30-60分钟左右，待指示前沿到达分离胶上沿时，把电压调至150-200v，至蓝色指示前沿至分离胶3/4位置时即可停止电泳。整个电泳过程大约需要3-4个小时。注：如果电泳时间过短，染色时，指示前沿容易遮挡1.4kD和3.5kD条带。
5. 如果关心较小的多肽（小于5KD），可以制备夹层胶，能更有效的分离小于5KD的小肽。
6. 染色：如果使用配方7进行染色时效果不好或考虑其毒性，请选择本公司的考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液（目录号：RTD6201），该产品除具有染色快，无毒，灵敏性高等特点外，在小肽的染色中还能起到固定小肽的作用，使得小肽不容易从胶中脱离，是常规染色液的理想替代品。当用配方6进行染色时，由于超低分子量多肽极易从凝胶中浸出，因此染色时间不要太长，染色一般要1个小时左右（Z多不要超过1.5小时）。
● 附：小分子蛋白质SDS-PAGE电泳试剂配制
| 1. 40%PAA（29:1）（配制浓缩胶） 丙稀酰胺 38.67 g 甲叉双丙稀酰胺 1.33 g 用ddH2O溶解后定容至100 ml，过滤后使用。 贮存：4℃ | 2. 40% PAA（19:1） （配制分离胶） 丙稀酰胺 38 g 甲叉双丙稀酰胺 2 g 用ddH2O溶解后定容至100 ml，过滤后使用。 贮存：4℃ | 3. 凝胶缓冲液（配制凝胶用） [3M Tris; 0.3% SDS; pH8.45] Tris碱 182g ddH2O 300ml 1.5 g SDS或15ml 10％ SDS 用HCl调pH值至8.45 用ddH2O定容至500ml 贮存：4℃ |
| 4. 10×阳极缓冲液（下槽缓冲液） [1M Tris pH8.9] Tris碱 121.1g ddH2O 400ml 用HCl调pH值至8.9 用ddH2O定容至500ml 贮存：4℃ 注：使用前稀释成1×阳极缓冲液使用。 | 5. 10×阴极缓冲液（上槽缓冲液） [1M Tris; 1M Tricine ;1% SDS; pH 8.25] Tris碱 121.14 g Tricine 179.2 g SDS 10g 用ddH2O溶解， 用HCl调节pH至8.25，定容至1000ml。 贮存：4℃ 注：使用前稀释成1×阴极缓冲液使用 | 6. 染色液 冰醋酸 100ml 考马斯亮蓝G-250 0.25g 水 900ml |
| 7. 脱色液 冰醋酸 100ml 水 900ml | 8. 2×Tricine蛋白样品上样缓冲液（10ml） 1ml 1M Tris-Cl pH6.8 2.4ml 甘油 0.8g SDS 0.31g DTT（或者400μl β-巯基乙醇） 2mg 考马斯亮蓝G-250 用灭菌ddH2O定容至10ml 混匀分装-20℃贮存备用 | |
超低分子量蛋白Marker凝胶的配制方法：
（一块0.75mm mini胶用量）
| | 分离胶 | 夹层胶 | 浓缩胶 |
| | 18％T, 5%C /6.0 ml | 10％T, 3.3%C /4.0 ml | 5％T, 3.3%C/4 ml |
| 40% PAA（19:1） | 2.7 ml | / | / |
| 40% PAA （29:1） | / | 1 ml | 0.5 ml |
| 凝胶缓冲液 | 1.5 ml | 1 ml | 1 ml |
| 乙二醇（电泳级） | 1.8 ml | / | / |
| ddH2O | / | 2 ml | 2.5 ml |
| 10％APS | 45 μl | 30 μl | 30 μl |
| TEMED | 9 μl | 6 μl | 6 μl |
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