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名称:免疫印迹及免疫沉淀用裂解液(不含蛋白酶磷酸酶YZ剂)北京价格
编号:SY0319
产地:国产|进口
规格:100ml
品Pai:百奥莱博
英文名:Lysis Buffer for WB/IP Assays (without enzyme inhibitors)
本品WB/IP裂解液,是一种非变性条件下的裂解液,可以有效维持原有的蛋白间的相互作用。其主要裂解成分为1%的Triton X-100,不含蛋白酶、磷酸酶等YZ剂,裂解得到的蛋白样品可用于Western、IP、CoIP以及许多兼容1%Triton X-100的酶活性或者生物小分子的检测。
注意事项
1)本品不含蛋白酶/磷酸酶YZ剂,使用前请根据实验情况添加合适酶YZ剂或不加酶YZ剂。
2)裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
3)如果WB/IP裂解液得到的蛋白样品是用于酶活性测试或一些生物小分子的检测,需要测试标准品用该裂解液稀释后是否会显著影响标准曲线,如无显著影响,则可继续使用。
4) 用WB/IP裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度(SY0298)。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
5)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
(一) 细胞样品
1)融解WB/IP裂解液(无YZ剂),混匀。取适当量的裂解液,根据实验目的决定是否添加适当酶YZ剂。
2)贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液清洗细胞一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入100-200μl 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。
悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100-200μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,需分装成5×105~1×106个细胞/管,然后再裂解。因为大团细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。
3)充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀、免疫共沉淀、酶或生物小分子检测等操作。
裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加入100μl裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150μl或200μl。
(二)组织样品:
1)把组织剪切成细小的碎片。
2)融解WB/IP裂解液(无YZ剂),混匀。取适当量的裂解液,根据实验目的决定是否添加适当酶YZ剂。
3)按照每20mg组织加入100-200μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)
4)用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
5)充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
6)如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得充分。
储存条件:-20℃,避免反复冻融,有效期12个月。
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免疫印迹及免疫沉淀用裂解液(不含蛋白酶磷酸酶YZ剂)北京价格
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