昆虫细胞裂解液50mL常温运输和保存,溶菌酶、Benzonase 和 PMSF 需低温运输。收到货后,介质需 4℃保存,溶菌酶、Benzonase 和 PMSF 需-20℃保存,有效期一年。
昆虫细胞裂解液50mL二:细胞裂解
5. 如果用本产品 A 型,用 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液(1 mL 1×PBS 缓冲液+50 uL 溶液 A+ 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液)重悬细菌沉淀,冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索,一般选 1K-10K 频率处理 15 次,每次20 秒,间隔 1 分钟(必需放置在冰上)。裂解物不能粘稠,否则会堵塞
层析柱。
6. 如果用本产品 B 型,在 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液(在 20 mL1×PBS 缓冲液中加入所有 30 mg 溶菌酶干粉,溶解后分装成 1 mL/管,取一管使用,剩余的-20℃放置)中加入 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液和 1 uL Benzonase,用此混合液重悬细菌沉淀后冰上放置 30 分钟,得到细菌裂解物。
7. 将超声或酶法细胞裂解物在 13000 g 4℃离心 10 分钟去除未裂解细胞和裂解细胞碎片以防堵柱,所得上清即含可溶性 GST 标记蛋白。
三:层析柱的制备和 GST 蛋白纯化
8. 摇晃将谷胱甘肽-Agarose 介质充分混匀后,取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据 GST 蛋白产量决定,100 mL 菌液一般使用 200 uL 介质即可)。下列步骤各溶液的用量均针对 200 uL 介质而定,如果介质用量不同,各溶液用量需相应调整。
9. 用 5 mL 预冷的 1×PBS 缓冲液洗柱。
10.将第 7 步得到的上清液(含可溶性 GST 标记蛋白)上柱,让重力使上柱液自然流出,收集并保存穿透液用于 SDS-PAGE 电泳。GST 和谷胱甘肽之间的结合很缓慢,所以流速一定不能快,否则结合不充分。流速一般在 0.2-1 mL/分钟即可。如要提高 GST 标记蛋白与介质的结合效率,可用本试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上,让细菌裂解液和介质在4℃结合 30 分钟或过夜。也可以将穿透液反复上柱。
11.用 0.5-2 mL 1×PBS 缓冲液洗柱,收集并保存穿透液(含杂蛋白)。
12.用 0.2-1 mL GST 洗脱液洗柱,收集并保存穿透液(含 GST 标记蛋白)。由于可能含蛋白酶污染,所以穿透液不能在 4℃放置,需立即用于后续处理(如浓度测定或 SDS-PAGE 电泳)或-80℃长期放置。
13.对收集的 2 种穿透液和洗脱液进行蛋白定量或 SDS-PAGE 分析。注意:如果不预先脱盐,则只能用 Bradford 法或 OD 检测法(1 OD280 约等于 0.5 mg/mL 蛋白)测定穿透液和洗脱液的蛋白浓度。由于 GST 的分子量为 26 KD,所以在 SDS-PAGE 胶上,GST 标记蛋白将比天然蛋白大 26 KD。
原理及特点:
重组蛋白 N 端的 GST 谷胱甘肽 S 转移酶(Glutathione S Transferase)能提高重组蛋白的水溶性,所以常用于蛋白质重组表达。GST-谷胱甘肽亲和层析是利用 GST 标记的蛋白能与谷胱甘肽层析介质结合,并能被还原型谷胱甘肽洗脱的特点而建立,是目前分离纯化 GST 标记蛋白质的重要方法。本产品就是专门用于上述目的,具有下列
昆虫细胞裂解液50mL特点:
1. 一站式套装,含所需的谷胱甘肽介质、溶液和层析柱,用户只需要提供表达 GST 标记蛋白的细菌(酵母、杆状病毒、培养细胞)即可,非常方便。
2. 专一性强,一次过柱即可获得纯度高达 95%的 GST-标记蛋白。
3. 只能在非变性条件下使用,只可用于纯化没形成包涵体的 GST 标记蛋白。
4. 每次可以处理 20 mL 的表达菌液,适合初步筛选和鉴定。
5. 提供 4 mL 浓度为 50%的谷胱甘肽-Agarose 介质,可吸附 5-10 mgGST 标记蛋白质。
6. 本介质可以反复使用多次。
一:重组蛋白的表达和细菌收集
1. 37℃振荡培养 20 mL 含表达质粒的细菌到 OD600=0.6-0.8。
2. 加 IPTG 到终浓度为 0.1 mM,30℃振荡培养 3 小时或 22℃振荡培养 8小时(或过夜)。
3. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液,弃上清。
4. 用 1×PBS 缓冲液重悬细菌沉淀,4℃ 5000 g 离心 10 分钟,弃上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。
小鼠花生四烯酸-15-脂加氧酶(ALOX15)elisa试剂盒,英文名:ALOX15 ELISA Kit
小鼠花生四烯酸-12-脂加氧酶(ALOX12)ELISA试剂盒,英文名:ALOX12 ELISA Kit
小鼠亨廷顿蛋白(HTT)ELISA试剂盒,英文名:HTT ELISA Kit
小鼠黑素瘤细胞黏附分子(MCAM)ELISA试剂盒,英文名:MCAM ELISA Kit
小鼠黑色素瘤抗原家族A1(MAGEA1)ELISA试剂盒,英文名:MAGEA1 ELISA Kit
小鼠核因子κBYZ因子α(IκBα)ELISA试剂盒,英文名:IκBα ELISA Kit
小鼠核因子κB受体激活因子配基(RANκL)ELISA试剂盒,英文名:RANκL ELISA Kit
小鼠核因子κB2(NFκB2)ELISA试剂盒,英文名:NFκB2 ELISA Kit
小鼠核因子κB(NFκB)ELISA试剂盒,英文名:NFκB ELISA Kit
小鼠核因子I/B(NFIB)ELISA试剂盒,英文名:NFIB ELISA Kit
小鼠核纤层蛋白A/C(LMNA)ELISA试剂盒,英文名:LMNA ELISA Kit
小鼠核糖核酸酶T2(RNASET2)ELISA试剂盒,英文名:RNASET2 ELISA Kit
小鼠核糖核酸酶A3(RNASE3)ELISA试剂盒,英文名:RNASE3 ELISA Kit
小鼠核受体亚家族3C组成员1(NR3C1)ELISA试剂盒,英文名:NR3C1 ELISA Kit
小鼠核仁素(NCL)ELISA试剂盒,英文名:NCL ELISA Kit
小鼠核仁磷酸蛋白(NPM)ELISA试剂盒,英文名:NPM ELISA Kit
小鼠核连蛋白1(NUCB1)ELISA试剂盒,英文名:NUCB1 ELISA Kit
小鼠核苷酸还原酶M1(RRM1)ELISA试剂盒,英文名:RRM1 ELISA Kit
小鼠和肽素(CPP)ELISA试剂盒,英文名:CPP ELISA Kit
小鼠含血管性血友病因子A域蛋白3A(vWA3A)ELISA试剂盒,英文名:vWA3A ELISA Kit
小鼠含血管性血友病因子A域蛋白1(vWA1)ELISA试剂盒,英文名:vWA1 ELISA Kit
小鼠含铜胺氧化酶3(AOC3)ELISA试剂盒,英文名:AOC3 ELISA Kit
小鼠含亮氨酸丰富重复蛋白3C(LRRC3C)ELISA试剂盒,英文名:LRRC3C ELISA Kit
小鼠含TCP1伴侣蛋白亚基2(CCT2)ELISA试剂盒,英文名:CCT2 ELISA Kit
昆虫细胞裂解液50mL小鼠含STIP1同源物U-框蛋白1(STUB1)ELISA试剂盒,英文名:STUB1 ELISA Kit
小鼠含IQ基元GTP酶激活蛋白2(IQGAP2)ELISA试剂盒,英文名:IQGAP2 ELISA Kit
小鼠含IQ基元GTP酶激活蛋白1(IQGAP1)ELISA试剂盒,英文名:IQGAP1 ELISA Kit
小鼠海藻糖酶(TREH)ELISA试剂盒,英文名:TREH ELISA Kit
小鼠过氧化物酶体增殖物激活受体δ(PPARδ)ELISA试剂盒,英文名:PPARδ ELISA Kit
小鼠过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PPARγC1α)ELISA试剂盒,英文名:PPARγC1α ELISA Kit
小鼠过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)ELISA试剂盒,英文名:PPARγ ELISA Kit
小鼠过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)ELISA试剂盒,英文名:PPARα ELISA Kit
小鼠过氧化物酶体生物合成因子2(PEX2)ELISA试剂盒,英文名:PEX2 ELISA Kit
小鼠过氧化还原酶6(PRDX6)ELISA试剂盒,英文名:PRDX6 ELISA Kit
小鼠过氧化还原酶4(PRDX4)ELISA试剂盒,英文名:PRDX4 ELISA Kit
小鼠过氧化还原酶1(PRDX1)ELISA试剂盒,英文名:PRDX1 ELISA Kit
小鼠归巢关联细胞黏附分子(HCAM)ELISA试剂盒,英文名:HCAM ELISA Kit
小鼠胱天蛋白酶9(CASP9)ELISA试剂盒,英文名:CASP9 ELISA Kit
小鼠胱天蛋白酶8(CASP8)ELISA试剂盒,英文名:CASP8 ELISA Kit
小鼠胱天蛋白酶7(CASP7)ELISA试剂盒,英文名:CASP7 ELISA Kit
小鼠胱天蛋白酶3(CASP3)ELISA试剂盒,英文名:CASP3 ELISA Kit
小鼠胱天蛋白酶14(CASP14)ELISA试剂盒,英文名:CASP14 ELISA Kit
小鼠胱天蛋白酶11(CASP11)ELISA试剂盒,英文名:CASP11 ELISA Kit
小鼠胱天蛋白酶1(CASP1)ELISA试剂盒,英文名:CASP1 ELISA Kit
小鼠胱硫醚β合酶(CβS)ELISA试剂盒,英文名:CβS ELISA Kit
小鼠骨形成蛋白8B(BMP8B)ELISA试剂盒,英文名:BMP8B ELISA Kit
小鼠骨形成蛋白6(BMP6)ELISA试剂盒,英文名:BMP6 ELISA Kit
小鼠骨形成蛋白1(BMP1)ELISA试剂盒,英文名:BMP1 ELISA Kit
小鼠骨骼肌特异性受体酪氨酸激酶(MUSK)ELISA试剂盒,英文名:MUSK ELISA Kit
小鼠骨骼肌慢肌肌钙蛋白T(TNNT1)ELISA试剂盒,英文名:TNNT1 ELISA Kit
小鼠骨骼肌快肌肌钙蛋白I(TNNI2)ELISA试剂盒,英文名:TNNI2 ELISA Kit
小鼠骨钙素(OC)ELISA试剂盒,英文名:OC ELISA Kit
小鼠骨成型蛋白受体Ⅱ(BMPRⅡ)ELISA试剂盒,英文名:BMPRⅡ ELISA Kit
小鼠钙蛋白酶10(CAPN10)ELISA试剂盒,英文名:CAPN10 ELISA Kit