一站式 TA 克隆试剂盒20 次_详细资料

产品信息

一站式 TA 克隆试剂盒20 次存放时间不能超过该温度下的Z长存放时间，如果要存放在-20℃或-80℃，需先将样品在 4℃放置过夜后再转移到的温度。

一站式 TA 克隆试剂盒20 次运输及保存:
常温运输和保存，但介质需 4℃保存，PMSF 需要-20℃保存，有效期一年。自备试剂去离子水、20%乙醇、0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜
使用方法
1. 将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 MBP 蛋白产量决定，其载量为 10 mg MBP蛋白/mL 介质，请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中）。
2. 用 5 倍柱体积（柱体积指的是填料介质的体积，下同）自备去离子水洗柱，共 3 次。
3. 用 5 倍柱体积的新配的结合缓冲液洗柱，进行平衡，使填料介质处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
4. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液，弃上清，将细胞沉淀（约100 mg）悬于 2 mL 冰冷的现配的细胞洗涤液中，4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞沉淀后，再次悬于 2 mL 冰冷的细胞洗涤液中。
一站式 TA 克隆试剂盒20 次5. 制备细胞裂解物：
1) 如果所用载体不带 MBP 信号肽序列（如 pMAL-c2）a) 超声破碎细胞，功率 30 W，保持细胞低温（0℃），直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。（超声参数需根据仪器型号自行摸索，但裂解物必须不粘稠，否则会堵塞层析柱。）b) 为使溶液澄清，向上述细胞洗涤液中加入 35 uL PMSF（10mg/mL）。c) 4℃下 13000-15000 g 离心 30 分钟，以去除残留细胞和细胞碎片
以防堵柱，收集上清样品，留样做 SDS-PAGE 电泳对照，其余样品用于纯化 MBP 融合蛋白，直接进入第 6 步。
2) 如果所用载体带 MBP 信号肽序列（如 pMAL-p2）a) 4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞，沉淀悬于 1 mL 冰冷的现配的细胞裂解液中。
6. 将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中（保证目的蛋白与介质充分接触，以提高目的蛋白的回收率），收集流出液。
7. 用 10-15 倍柱体积的结合缓冲液（配方见上表）进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
8. 使用 5-10 倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白，收集洗脱液（即目的蛋白组分）。
11. 用适当的蛋白酶切割融合蛋白释放靶蛋白。
1) 加入自备的凝血酶、肠激酶或 Xa 因子（根据融合蛋白中的位点选择）。每毫升介质中加入 50 单位的溶于 1 mL PBS 溶液的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀，室温下振荡 2-16 小时。
2) 4℃以 500 g 离心 5 分钟，上清小心转移到新离心管中。
3) 用传统的层析方法或 SDS-PAGE 电泳分离靶蛋白和蛋白酶。
一站式 TA 克隆试剂盒20 次产品及特点:
MBP（麦芽糖结合蛋白，Maltose Binding Protein）标签蛋白大小为 40kDa，由大肠杆菌 K12 的 malE 基因编码。MBP 可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。如果蛋白在细菌中表达，MBP 可以融合在蛋白的 N 端或 C 端。MBP 融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化，结合的融合蛋白可用 10 mM 麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。如果要去除 MBP 融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。可用 MBP 抗体或表达的目的蛋白特异性抗
体检测 MBP 标签标记的重组蛋白。由于 MBP 融合蛋白原核表达载体具有表达效率高，易于纯化等优点。在现代分子克隆中 MBP 常作为融合蛋白被广泛应用。
本产品就是专门用于分离纯化 MBP 融合蛋白的试剂盒，它具有下列特点：
1. 一站式套装，含所需的直链淀粉和琼脂糖介质、溶液和层析柱，操作非常方便。
2. 提供 2 mL 直链淀粉-琼脂糖介质，其载量为 10 mg MBP 蛋白/mL介质。
3. 采用麦芽糖温和洗脱，无去污剂和变性剂对蛋白活性的影响。
4. 本介质可以反复使用多次。
猪肝炎病毒细胞的受体1/肾损伤分子1/KIM1(HAVCR1)ELISA KitPig hepatitis A virus cellular receptor 1/KIM1,HAVCR1 ELISA kit
猪甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)ELISA KitPig Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH ELISA kit
猪钙/钙调素依赖性蛋白激酶2δ(CAMK2D)ELISA KitPig CAMK2D ELISA kit
猪钙/钙调素依赖性蛋白激酶2γ(CAMK2G/CAMKG)ELISA KitPig CAMK2G/CAMKG ELISA kit
猪钙/钙调素依赖性蛋白激酶2β(CAMK2B/CAM2/CAMKB)ELISA KitPig CAMK2B/CAM2/CAMKB ELISA kit
猪钙/钙调素依赖性蛋白激酶2α(CAMK2A/CAMKA/KIAA0968)ELISA KitPig CAMK2A/CAMKA/KIAA0968 ELISA kit
猪脯氨酸羟化酶(PHD)ELISA KitPig prolyl hydroxylases,PHD ELISA Kit
猪分泌型免疫球蛋白A(sIgA)ELISA KitPig secretory immunoglobulin A,SIgA ELISA Kit
猪肺炎支原体抗体(MP-Ab)ELISA KitPig Mycoplasma pneumoniae antibody(MP-Ab)ELISA Kit
猪肺表面活性物质相关蛋白C(SP-C)ELISA KitPig Pulmonary surfactant-associated protein C,SP-C ELISA Kit
猪肺表面活性物质相关蛋白B(SP-B)ELISA KitPig Pulmonary surfactant-associated protein B,SP-B ELISA Kit
猪儿茶酚铵(CA)ELISA KitPig catecholamine,CA ELISA Kit
猪多肽YY(PYY)ELISA KitPig Peptide YY,PYY ELISA kit
猪多巴铵(DA)ELISA KitPig dopamine,DA ELISA Kit
猪凋亡相关因子(FAS/CD95)ELISA KitPig Factor-related Apoptosis,FAS ELISA Kit
猪淀粉样前体蛋白(βAPP)ELISA KitPig β amyloid precursor protein,βAPP ELISA Kit
猪低氧诱导因子1α(HIF-1α)ELISA KitProcine hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α ELISA Kit
猪弹性蛋白(ELN)ELISA KitPig Elastin,ELN ELISA Kit
猪胆囊收缩素/肠促胰酶肽(CCK)ELISA KitPig cholecystokinin,CCK ELISA Kit
猪单核细胞趋化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA KitPig monocyte chemotactic protein 1,MCP1 ELISA Kit
猪催乳素(PRL)ELISA KitPig prolactin,PRL ELISA Kit
猪催产素(OT)ELISA KitPig oxytocin,OT ELISA Kit
猪促性腺激素YZ激素(GnIH)ELISA KitPig gonadotropin-inhibitory hormone,GnIH ELISA kit
猪促肾上腺皮质激素(ACTH)ELISA KitPig adrenocorticotropic hormone,ACTH ELISA kit
猪促甲状腺素(TSH)ELISA KitPig Thyroid Stimulating Hormone,TSH ELISA Kit
猪雌激素(E)ELISA KitPig Estrogen,E ELISA Kit
猪成纤维细胞生长因子19(FGF19)ELISA KitPig fibroblast growth factor 19,FGF19 ELISA Kit
猪肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)ELISA KitPig intestinal fatty acid binding protein,iFABP ELISA Kit
猪补体因子H(CFH)ELISA KitPig Complement factor H,CFH ELISA kit
猪补体片断5b(C5b)ELISA KitPig complement fragment 5b,C5b ELISA kit
猪补体片断5a(C5a)ELISA KitPig complement fragment 5a,C5a ELISA kit
猪补体蛋白4(C4)ELISA KitPig Complement 4,C4 ELISA Kit
猪表达于SiSo细胞系的受体结合型肿瘤抗原(EBAG9)ELISA KitPig Receptor-binding cancer antigen expressed on SiSo cells,EBAG9 ELISA kit
猪白三烯B4(LTB4)ELISA KitPig Leukotriene B4,LTB4 ELISA Kit
猪白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA KitPorcine interleukin 8,IL-8 ELISA Kit
猪白介素6(IL-6)ELISA KitPorcine Interleukin 6,IL-6 ELISA Kit
猪白介素22(IL-22)ELISA KitPig Interleukin 22,IL-22 ELISA Kit
猪白介素1受体拮抗剂(IL1Ra)ELISA KitPig Interleukin 1 receptor antagonist,IL-1ra ELISA kit
猪白介素1α(IL-1α)ELISA KitPig Interleukin 1α ,IL-1α ELISA kit
猪白介素15(IL-15)ELISA KitPig Interleukin 15,IL-15 ELISA Kit
一站式 TA 克隆试剂盒20 次猪白介素13(IL-13)ELISA KitPig Interleukin 13,IL-13 ELISA Kit
猪白介素12(IL-12/P70)ELISA KitPig Interleukin 12,IL-12/P70 ELISA Kit
猪白介素10(IL-10)ELISA KitPorcine interleukin 10,IL-10 ELISA Kit
猪白蛋白(Albumin)ELISA KitPig Albumin ELISA Kit
猪γ淀粉酶(AMY)ELISA KitPig γ-amylase,AMY ELISA Kit
猪β血小板球蛋白/β血栓环蛋白(β-TG)ELISA KitPig β-Thromboglobulin,β-TG ELISA Kit
猪β内啡肽(β-EP)ELISA KitPig Beta-Endorphin,β-EP ELISA Kit
猪β干扰素(IFN-β/IFNB)ELISA KitPig Interferon β,IFN-β/IFNB ELISA Kit
猪αN乙酰葡糖铵糖苷酶(NAGLU)ELISA KitPig alpha-N-acetylglucosaminidase,NAGLU ELISA kit
猪α1酸性糖蛋白(α1-AGP)ELISA KitPig α1-Acid glycoprotein,α1-AGP ELISA Kit
猪Tau蛋白(Tau)ELISA KitPig Tau Proteins ELISA kit
猪Syndecan-1/CD138(SDC1)ELISA KitPig Syndecan-1/CD138,SDC1 ELISA Kit
猪S100B蛋白(S-100B)ELISA KitPig Soluble protein-100B,S-100B ELISA Kit
猪p物质(SP)ELISA KitPig Substance P,SP ELISA Kit
猪P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)ELISA KitPig Cytochrome P450 Side Chain Cleavage Enzyme,P450scc ELISA kit
猪N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA KitPig N-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAG ELISA Kit
猪Na+/K+-ATP酶(Na/K ATPase)ELISA KitPig Na+/K+-ATPase ELISA kit

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