Top10 化学感受态细胞0.1mL×10_详细资料

产品信息

Top10 化学感受态细胞0.1mL×10存放时间不能超过该温度下的Z长存放时间，如果要存放在-20℃或-80℃，需先将样品在 4℃放置过夜后再转移到的温度。

Top10 化学感受态细胞0.1mL×10产品及特点:
MBP（麦芽糖结合蛋白，Maltose Binding Protein）标签蛋白大小为 40kDa，由大肠杆菌 K12 的 malE 基因编码。MBP 可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。如果蛋白在细菌中表达，MBP 可以融合在蛋白的 N 端或 C 端。MBP 融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化，结合的融合蛋白可用 10 mM 麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。如果要去除 MBP 融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。可用 MBP 抗体或表达的目的蛋白特异性抗
体检测 MBP 标签标记的重组蛋白。由于 MBP 融合蛋白原核表达载体具有表达效率高，易于纯化等优点。在现代分子克隆中 MBP 常作为融合蛋白被广泛应用。
本产品就是专门用于分离纯化 MBP 融合蛋白的试剂盒，它具有下列特点：
1. 一站式套装，含所需的直链淀粉和琼脂糖介质、溶液和层析柱，操作非常方便。
2. 提供 2 mL 直链淀粉-琼脂糖介质，其载量为 10 mg MBP 蛋白/mL介质。
3. 采用麦芽糖温和洗脱，无去污剂和变性剂对蛋白活性的影响。
4. 本介质可以反复使用多次。
运输及保存:
常温运输和保存，但介质需 4℃保存，PMSF 需要-20℃保存，有效期一年。自备试剂去离子水、20%乙醇、0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜
Top10 化学感受态细胞0.1mL×10使用方法
1. 将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 MBP 蛋白产量决定，其载量为 10 mg MBP蛋白/mL 介质，请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中）。
2. 用 5 倍柱体积（柱体积指的是填料介质的体积，下同）自备去离子水洗柱，共 3 次。
3. 用 5 倍柱体积的新配的结合缓冲液洗柱，进行平衡，使填料介质处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
4. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液，弃上清，将细胞沉淀（约100 mg）悬于 2 mL 冰冷的现配的细胞洗涤液中，4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞沉淀后，再次悬于 2 mL 冰冷的细胞洗涤液中。
5. 制备细胞裂解物：
1) 如果所用载体不带 MBP 信号肽序列（如 pMAL-c2）a) 超声破碎细胞，功率 30 W，保持细胞低温（0℃），直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。（超声参数需根据仪器型号自行摸索，但裂解物必须不粘稠，否则会堵塞层析柱。）b) 为使溶液澄清，向上述细胞洗涤液中加入 35 uL PMSF（10mg/mL）。c) 4℃下 13000-15000 g 离心 30 分钟，以去除残留细胞和细胞碎片
以防堵柱，收集上清样品，留样做 SDS-PAGE 电泳对照，其余样品用于纯化 MBP 融合蛋白，直接进入第 6 步。
2) 如果所用载体带 MBP 信号肽序列（如 pMAL-p2）a) 4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞，沉淀悬于 1 mL 冰冷的现配的细胞裂解液中。
6. 将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中（保证目的蛋白与介质充分接触，以提高目的蛋白的回收率），收集流出液。
7. 用 10-15 倍柱体积的结合缓冲液（配方见上表）进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
8. 使用 5-10 倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白，收集洗脱液（即目的蛋白组分）。
11. 用适当的蛋白酶切割融合蛋白释放靶蛋白。
1) 加入自备的凝血酶、肠激酶或 Xa 因子（根据融合蛋白中的位点选择）。每毫升介质中加入 50 单位的溶于 1 mL PBS 溶液的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀，室温下振荡 2-16 小时。
2) 4℃以 500 g 离心 5 分钟，上清小心转移到新离心管中。
3) 用传统的层析方法或 SDS-PAGE 电泳分离靶蛋白和蛋白酶。
人谷氨酸受体(NMDAR)ELISA KitHuman glutamate receptor,NMDAR ELISA Kit
人谷氨酸-半胱氨酸连接酶调节亚基(GCLM)ELISA KitHuman GCLM ELISA Kit
人谷氨酸[NMDA]受体亚基ε-2(NR-2)抗体ELISA KitHuman NR-2 Antibody ELISA Kit
人谷氨酸[NMDA]受体亚基ε-2(NR-2)ELISA KitHuman NR-2 ELISA Kit
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人弓蛔虫(Tc)抗体(IgG)ELISA KitHuman Tc IgG ELISA kit
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人庚型肝炎病毒(HGV)抗体(IgG)ELISA KitHuman HGV IgG ELISA kit
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人高危型乳头状瘤病毒衣壳蛋白L1(HR-HPVL1)抗体(IgG)ELISA KitHuman high risk papillomavirus L1-capsids(HR-HPVL1)antibody(IgG)ELISA kit
人高糖基化人绒毛膜促性腺激素(hCG)ELISA KitHuman hCG ELISA Kit
人高密度脂蛋白3(HDL3)ELISA KitHuman high density lipoprotein 3,HDL3 ELISA Kit
人高密度脂蛋白2(HDL2)ELISA KitHuman High density lipoprotein 2,HDL2 ELISA Kit
人高密度脂蛋白1(HDL1)ELISA KitHuman High density lipoprotein 1,HDL1 ELISA Kit
人高分子量脂联素(HMW Adiponectin)ELISA KitHuman High Molecular Weight Adiponectin,HMW Adiponectin ELISA Kit
人高尔基体抗体(AGAA)ELISA KitHuman anti-golgi apparatus antibody,AGAA ELISA Kit
人高半胱氨酸(Hcy)ELISA KitHuman Homocysteine,HCY ELISA Kit
人肝脏型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)ELISA KitHuman L-FABP ELISA Kit
人肝脏甘油三脂脂肪酶(HTGL)ELISA KitHuman hepatic triglyceride lipase,HTGL ELISA Kit
人肝细胞生长因子激活物(HGFA)ELISA KitHuman HGFA ELISA kit
人肝细胞核因子1β(HNF-1B)ELISA KitHuman HNF-1B ELISA Kit
人肝素-血小板因子4复合物抗体(IgG)ELISA KitHuman Heparin-Platelet factor4 Complex antibody IgG ELISA Kit
人肝素结合EGF样生长因子(HBEGF)ELISA KitHuman HBEGF ELISA Kit
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人肝素辅因子Ⅱ(HCⅡ)ELISA KitHuman HCⅡ ELISA Kit
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人甘油三酯(TG)ELISA KitHuman Triglyceride,TG ELISA Kit
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人甘露糖凝集素受体(MBLR)ELISA KitHuman Mannma binding lectin receptor,MBLR ELISA Kit
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