一:合成 PCR 用的 1st-strand cDNA
1. 按下表配制 RT 反应体系:RNA RNA 100-500 ng poly(A) mRNA 10-500 ng或专一的 RNA 0.01 pg-500 ng
注意:RNA 样品不能含有基因组 DNA 污染。引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或 RNA 模板专一性引物 15-20 pmol
注意:随机引物与 RNA 模板的比例跟 cDNA 合
天净沙 SPIA 扩增试剂盒 ( 用于扩增 DNA 模板 )20 次成的平均长度成反比。
RNase-free 水 补水到 13 uL
2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保温 5 分钟。对富含二级结构的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保温 5 分钟。如果使用随机引物,则改成 25℃ 5 分钟。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶(含 RI),反应终体积为 20 uL。
6. 42℃保温 60 分钟(但如果使用随机引物,需要先 25℃保温 10 分钟,然后再转移到 42℃保温 60 分钟)。此步为 RT 反应。
7. 70℃保温 10 分钟以终止反应,然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作为 PCR 模板使用,不需要纯化。天净沙 SPIA 扩增试剂盒 ( 用于扩增 DNA 模板 )20 次产品及特点:
本试剂盒提供合成 cDNA 链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏鼠白血病病毒反转录酶(M-MuLV RT)GX合成 mRNA 的全长 cDNA 拷贝。
1. 使用突变的反转录酶,内源 RNase H 活性低。
2. Z长可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、随机引物和 RNA 专一性引物三种引物(前两种本试剂盒提供)。
4. 总 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作为模板。
5. 可用于 cDNA 文库构建、RT-PCR、探针标记等。
C20orf12820号染色体开放阅读框128抗体
CYP2E1细胞色素P450ⅡE1抗体
CXCL13/BCA1B-淋巴细胞趋化因子抗体
Cdc23细胞分裂周期蛋白23抗体
CKAP5结肠和肝肿瘤高表达蛋白抗体
CKS1细胞周期蛋白依赖性激酶调节亚基1抗体
ICAM1细胞间粘附分子-1抗体
ICAM1细胞间粘附分子1抗体
ICAM1细胞间粘附分子-1抗体
ICAM1细胞间粘附分子-1抗体
ICAM1细胞间粘附分子-1抗体
Cyclophilin F亲环蛋白(亲环素)PPIF抗体
Catalase过氧化氢酶抗体
CLIC4细胞内氯离子通道蛋白4抗体
CGR19细胞生长调控蛋白19/环指蛋白197抗体
CCDC139卷曲螺旋结构域蛋白139抗体
CHMP1A染色体修饰蛋白1抗体(金属蛋白酶1)
CAPS1钙依赖分泌激活蛋白1抗体
CBLN1小脑肽1抗体
CBLN2小脑肽2抗体
CBLN4小脑肽4抗体
CCM2脑海绵状血管畸形蛋白2抗体
CELSR2表皮生长因子样蛋白2抗体
CHRDL1脊索生成素样蛋白1抗体
CHURC1神经诱导胚胎发育相关蛋白Churchill抗体
CRMP3二氢嘧啶酶相关蛋白3抗体
CRSP9转录激活蛋白CRSP9抗体
Copine-6神经网蛋白CopineVI抗体
Cpt1c脑型肉碱棕榈酰转移酶1C抗体
Factor B补体因子B抗体
CHRNA1乙酰胆碱受体前体蛋白AChRα1抗体
天净沙 SPIA 扩增试剂盒 ( 用于扩增 DNA 模板 )20 次CSFV Envelope glycoprotein E2猪瘟病毒包膜糖蛋白E2抗体
CSDC2冷休克结构域蛋白C2抗体
CA10碳酸酐酶10抗体
CD62LL选择素抗体
C-Myc致癌基因C-Myc抗体
CCK8胆囊收缩素8抗体
E cadherin上皮钙粘附分子抗体
CITED1结合转化激活因子CITED1抗体
Collagen IIⅡ型胶原α1蛋白/软骨钙素抗体
CSMD2CSMD2蛋白抗体
CSMD3CSMD3蛋白抗体
CSTP1钙调神经磷酸酶CSTP1抗体
CTAGE6CTAGE6蛋白抗体
CTAGE4皮肤T细胞淋巴瘤相关抗原4抗体
CLDND2膜蛋白CLDND2抗体
CHORDC1含半胱氨酸和组氨酸丰富域蛋白1抗体
capsid protein猪圆环病毒Ⅱ型衣壳蛋白
CathelicidinKJ肽CAMP抗体
CCDC134卷曲螺旋结构域蛋白134抗体
CCDC69卷曲螺旋结构域蛋白69抗体
CCDC98卷曲螺旋结构域蛋白98抗体
CCDC70卷曲螺旋结构域蛋白70抗体
CCDC51卷曲螺旋结构域蛋白51抗体
CCDC125卷曲螺旋结构域蛋白125抗体
CCDC50卷曲螺旋结构域蛋白50抗体
CCDC90A卷曲螺旋结构域蛋白90A抗体