一:合成 PCR 用的 1st-strand cDNA
1. 按下表配制 RT 反应体系:RNA RNA 100-500 ng poly(A) mRNA 10-500 ng或专一的 RNA 0.01 pg-500 ng
注意:RNA 样品不能含有基因组 DNA 污染。引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或 RNA 模板专一性引物 15-20 pmol
注意:随机引物与 RNA 模板的比例跟 cDNA 合
单细胞全基因组扩增试剂盒30 次成的平均长度成反比。
RNase-free 水 补水到 13 uL
2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保温 5 分钟。对富含二级结构的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保温 5 分钟。如果使用随机引物,则改成 25℃ 5 分钟。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶(含 RI),反应终体积为 20 uL。
6. 42℃保温 60 分钟(但如果使用随机引物,需要先 25℃保温 10 分钟,然后再转移到 42℃保温 60 分钟)。此步为 RT 反应。
7. 70℃保温 10 分钟以终止反应,然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作为 PCR 模板使用,不需要纯化。单细胞全基因组扩增试剂盒30 次产品及特点:
本试剂盒提供合成 cDNA 链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏鼠白血病病毒反转录酶(M-MuLV RT)GX合成 mRNA 的全长 cDNA 拷贝。
1. 使用突变的反转录酶,内源 RNase H 活性低。
2. Z长可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、随机引物和 RNA 专一性引物三种引物(前两种本试剂盒提供)。
4. 总 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作为模板。
5. 可用于 cDNA 文库构建、RT-PCR、探针标记等。
CLDND1膜蛋白CLDND1抗体
CRMP1二氢嘧啶酶相关蛋白1抗体
Chloramphenicol氯霉素单克隆抗体
CD98CD98重链抗原抗体
Calpastatin钙蛋白酶YZ蛋白抗体
cGKIcGMP依赖性蛋白激酶1抗体
CaIPLA2胞浆钙独立磷脂酶A2抗体
C1orf98 1号染色体开放阅读框98抗体
COX4NBCOX4NB蛋白抗体
CPXCR1肿瘤/睾丸抗原77抗体
CD81CD81抗体
COQ10B辅酶Q10B抗体
CRLF1细胞因子受体样因子1抗体
CSAD半胱氨酸亚磺酸脱羧酶抗体
CHCHD2丙型肝炎NS2反式调节蛋白/衰老相关的基因10蛋白抗体
CYP11B2醛固酮合成酶CYP11B2抗体
CDCA8细胞分裂周期蛋白8抗体
CCDC5卷曲螺旋结构域蛋白5抗体
CDC16细胞分裂周期蛋白16抗体
CENPF有丝分裂着丝粒蛋白F抗体
C9orf1159号染色体开放阅读框115抗体
CTDSPLCTDSPL蛋白抗体
CTDSPL2CTDSPL2蛋白抗体
CUTA乙酰胆碱酯酶相关蛋白抗体
CCDC83卷曲螺旋结构域蛋白83抗体
CRMP5二氢嘧啶酶相关蛋白5抗体
Phospho-CRMP2 (Thr514+Ser518)磷酸化二氢嘧啶酶样2抗体
CRMP4脑衰蛋白反应调节蛋白4抗体
CCDC87卷曲螺旋结构域蛋白87抗体
CCDC92卷曲螺旋结构域蛋白92抗体
CHCHD8卷曲螺旋结构域蛋白CHCHD8抗体
CCDC88B大脑亮氨酸拉链结构域蛋白抗体
CCDC93卷曲螺旋结构域蛋白93抗体
CCDC96卷曲螺旋结构域蛋白96抗体
单细胞全基因组扩增试剂盒30 次CHCHD5卷曲螺旋结构域蛋白CHCHD5抗体
CHCHD6卷曲螺旋结构域蛋白CHCHD6抗体
CHCHD6卷曲螺旋结构域蛋白CHCHD6抗体
CEND1细胞周期通道和神经细胞分化蛋白1抗体
COLEC10(liver)凝集蛋白家族10抗体(肝)
COMMD7铜代谢结构域蛋白7抗体
COMMD4COMM结构域蛋白4抗体
COBLL1Cordon bleu蛋白样1抗体
COLEC11凝集蛋白家族11抗体
COMMD1铜代谢结构域蛋白1抗体
C20orf96 20号染色体开放阅读框96抗体
C3orf263号染色体开放阅读框26抗体
CADM2细胞粘附分子2抗体
COBL耳聋-甲状腺肿综合征相关COBL蛋白抗体
C20orf19520号染色体开放阅读框195抗体
C7orf627号染色体开放阅读框62抗体
C9orf1749号染色体开放阅读框174抗体
C6orf646号染色体开放阅读框64抗体
CD32免疫球蛋白G Fc段受体Ⅱ抗体