2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内完全解冻,使细胞能尽快通过Z易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
1)贴壁细胞传代:提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热,用75%酒精擦拭后再放入超净台内,吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液,加少量PBS润洗细胞,加入适量胰酶,使胰酶的量能盖住细胞,37℃孵育,每隔2~3min显微镜下观察,待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶,加入新鲜培养基,晃动细胞瓶,终止胰酶作用,用吸管小心吹打贴壁的细胞,制成细胞悬液。控制吹打的力度,避免产生大量的气泡,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养,隔天观察贴壁生长情况。
2)悬浮细胞传代:将细胞悬液转移到无菌离心管内,1000rpm离心5min,弃去上清,加入新鲜的培养基,用吸管小心吹散沉淀,制成细胞悬液,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养。
1超氧化物歧化酶2抗原进口/国产英文名称:SOD2 (superoxide-dimutase-2)
生长抑素抗原进口/国产英文名称:Somatostatin/GRIH
胚胎干细胞关键蛋白进口/国产英文名称:Sox2
SP1转录生长因子抗原进口/国产英文名称:TSFP1/SP1(transcription factor Sp1)
富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白抗原进口/国产英文名称:SPARC (secreted protein acidic and rich in cysteine)
血清应答因子抗原进口/国产英文名称:SRF(Serum response factor)
固醇调节元件结合蛋白1抗原进口/国产英文名称:SREBP-1(Sterol Regulatory Element Binding Protein-1)
丝氨酸YZ蛋白激酶C底物抗原进口/国产英文名称:AKAP12A/SSeCKS peptide
阶段特异性胚胎表面抗原-1抗原进口/国产英文名称:Fut4/CD15/SSEA-1(Stage-specific embryonic surface antigen 1)
生长抑素受体1(SSTR1)抗原进口/国产英文名称:SSTR1 (somatostatin receptor 1)
生长抑素受体2抗原进口/国产英文名称:SSTR2 (somatostatin receptor 2)
生长抑素受体3抗原进口/国产英文名称:SSTR3 peptide
生长抑素受体5抗原进口/国产英文名称:SSTR5 (somatostatin receptor 5)
信号转导与转录激活因子1抗原进口/国产英文名称:STAT1(signal transducers and activators of transcription 1)
磷酸化信号转导与转录激活因子1抗原进口/国产英文名称:phospho-STAT1(p-Tyr701) peptide
信号转导和转录激活因子3抗原进口/国产英文名称:STAT3(signal transducers and activators of transduction3)
信号转导和转录激活因子5(STAT5)抗原进口/国产英文名称:STAT5(signal transducers and activators of transduction5)
信号转导和转录激活因子6抗原进口/国产英文名称:STAT6(signal transducers and activators of transduction 6)
雌激素硫酸转移酶抗原进口/国产英文名称:SULT1E1(Estrogen Sulfotranferase)
类泛素蛋白进口/国产英文名称:SUMO
磷酸化微管相关蛋白多肽进口/国产英文名称:phospho-Tau protein (pThr489) peptide
微管相关蛋白2抗原进口/国产英文名称:MAP-2(microtubule associated protein 2)
微管相关蛋白1A抗原进口/国产英文名称:MAP1A/Mtap1a(microtubule associated protein 1A)
新型抑癌基因(多肽)进口/国产英文名称:TBX2/T-box2(T-box Protein 2)
转录因子7类似物2抗原进口/国产英文名称:TCF7L2(transcription factor 7-like 2)
Tar DNA 结合蛋白43抗原进口/国产英文名称:TDP-43/TARDBP (tar DNA binding protein)
大鼠纤维母细胞;1/EJ 1-1现货供应固生蛋白抗原进口/国产英文名称:Tenascin
内涎蛋白/内皮唾液酸蛋白抗原进口/国产英文名称:TEM 1/CD248(Tumor endothelial marker 1 precursor)
三叶肽因子3(多肽)进口/国产英文名称:TFF3 (trefoil factor3)
组织因子途径YZ剂-2抗原进口/国产英文名称:TFPI-2 (tissue factor pathway inhibitor-2)
TGF-β诱导早期应答基因1抗原进口/国产英文名称:TIEG1/KLF10(TGF-beta inducible early response gene 1)
转移生长因子–β受体1抗原进口/国产英文名称:TGF- BetaR1/ALK (TGF-beta receptor type I)
Erdj5/DNAJC10多肽进口/国产英文名称:Erdj5/DNAJC10
上皮生长因子样域酪氨酸激酶1抗原进口/国产英文名称:Tie1/JTK14 peptide
上皮生长因子样域酪氨酸激酶2抗原进口/国产英文名称:Tie2(Porcine tyrosine kinase with immunoglobulin-like and EGF-like domains 2)
视黄酸受体应答蛋白2抗原进口/国产英文名称:Rarres2/TIG2/Chemerin(Retinoic acid receptor responder protein 2)
Toll样受体3抗原进口/国产英文名称:TLR3 (Toll-like receptor 3)
Toll样受体4抗原进口/国产英文名称:TLR4/CD284 (Toll-like receptor 4)
Toll样受体5抗原进口/国产英文名称:TLR5/CD285 (Toll-like receptor 5)
血栓调节蛋白多肽进口/国产英文名称:TM(Thrombomodulin)
腱糖蛋白-C(固生蛋白)C端抗原进口/国产英文名称:Tn-C(Tenascin-C)C-Terminus
肿瘤坏死因子-α抗原进口/国产英文名称:TNF-alpha
肿瘤坏死因子-β抗原进口/国产英文名称:TNF- Beta(Tumor Necrosis Factor- Beta)