2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内完全解冻,使细胞能尽快通过Z易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
1)贴壁细胞传代:提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热,用75%酒精擦拭后再放入超净台内,吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液,加少量PBS润洗细胞,加入适量胰酶,使胰酶的量能盖住细胞,37℃孵育,每隔2~3min显微镜下观察,待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶,加入新鲜培养基,晃动细胞瓶,终止胰酶作用,用吸管小心吹打贴壁的细胞,制成细胞悬液。控制吹打的力度,避免产生大量的气泡,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养,隔天观察贴壁生长情况。
2)悬浮细胞传代:将细胞悬液转移到无菌离心管内,1000rpm离心5min,弃去上清,加入新鲜的培养基,用吸管小心吹散沉淀,制成细胞悬液,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养。
1Rhesus antibody Rhphospho-EIF4EBP1(Ser111) 磷酸化eIF4E结合蛋白抗体规格 0.1ml
Rhesus antibody Rhphospho-EIF4EBP1(Ser100) 磷酸化eIF4E结合蛋白抗体规格 0.1ml
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绿色荧光蛋白标记小鼠前胃癌细胞,MFC-GFP细胞现货供应Rhesus antibody Rhphospho-EGFR (Ser695) 磷酸化表皮生长因子受体抗体规格 0.1ml
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Rhesus antibody Rhphospho-E2F1 (Ser337) 磷酸化转录因子E2F-1抗体规格 0.1ml
Rhesus antibody Rhphospho-E2F1 (Ser332) 磷酸化转录因子E2F-1抗体规格 0.1ml
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Rhesus antibody Rhphospho-DOK1 (Tyr398) 磷酸化D酪氨酸激酶衰减蛋白1抗体规格 0.1ml
Rhesus antibody Rhphospho-Dnmt1(Tyr969) 磷酸化DNA甲基转移酶1抗体规格 0.1ml
Rhesus antibody Rhphospho-Dnmt1(Tyr399) 磷酸化DNA甲基转移酶1抗体规格 0.1ml
Rhesus antibody Rhphospho-Dnmt1(Ser732) 磷酸化DNA甲基转移酶1抗体规格 0.1ml
Rhesus antibody Rhphospho-Dnmt1(Ser154) 磷酸化DNA甲基转移酶1抗体规格 0.1ml