规格:5×106
运输方式:干冰或者活体细胞运输,保证细胞运输中的存活率。
特点:细胞代数为4-5代左右。
包装:内层无菌自封袋、专用防压泡沫盒、外层防压保温气泡袋、说明书。
细胞特性
1) 来源:胚胎
2) 形态:贴壁生长;悬浮生长(使用专用悬浮培养基,细胞呈悬浮生长状态;使用MEM-EBSS + NEAA + 10%FBS培养基时,细胞呈贴壁生长状态)
3) 含量:>1x106 个/mL
4) 污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5) 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
运输和保存:使用含有优质胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收到细胞后,可在1000RPM,常温条件下,离心5min后,于洁净操作台弃去上清,加入推荐使用的培养基后转移至10cm培养皿或者T25培养瓶中培养,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途:仅供科研使用。
细胞培养步骤
一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 按照实验目的,准备不同培养基(若为悬浮培养,则需选用293悬浮细胞专用培养基,若为贴壁生长,则选择:MEM- NEAA:GIBCO,货号41500-018,90%;优质胎牛血清,10%)
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%完全培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二. 细胞处理:
1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
人体肾脏细胞系上海直销操作步骤:
1)贴壁细胞传代:提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热,用75%酒精擦拭后再放入超净台内,吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液,加少量PBS润洗细胞,加入适量胰酶,使胰酶的量能盖住细胞,37℃孵育,每隔2~3min显微镜下观察,待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶,加入新鲜培养基,晃动细胞瓶,终止胰酶作用,用吸管小心吹打贴壁的细胞,制成细胞悬液。控制吹打的力度,避免产生大量的气泡,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养,隔天观察贴壁生长情况。
2)悬浮细胞传代:将细胞悬液转移到无菌离心管内,1000rpm离心5min,弃去上清,加入新鲜的培养基,用吸管小心吹散沉淀,制成细胞悬液,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养。
1. 收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
Goat Anti-Mouse IgG/APC活性依赖的神经保护肽(抗原)0.1ml
Goat Anti-Mouse IgG/Bio活性依赖的神经保护肽抗体0.2ml
Goat Anti-Mouse IgG/Cy3霍乱肠毒素β链抗体0.2ml
Goat Anti-Mouse IgG/Cy5肌醇单磷酸酶IMPA3抗体0.2ml
Goat Anti-Mouse IgG/Cy5.5肌醇聚磷酸盐磷酸酶样蛋白1抗体0.2ml
Goat Anti-Mouse IgG/Cy7肌蛋白结合蛋白γ2抗体0.2ml
Goat Anti-Mouse IgG/FITC肌动蛋白(抗原)0.2ml
Goat Anti-Mouse IgG/Gold肌动蛋白α/α-SMA/α Actin抗体0.2ml
Goat Anti-Mouse IgG/HRP肌动蛋白α/α-SMA/α Actin抗体0.2ml
Goat Anti-Mouse IgG/PE肌动蛋白结合蛋白1抗体0.2ml
Goat Anti-Mouse IgG/PE-Cy3肌动蛋白结合蛋白CFL抗体0.2ml
Goat Anti-Mouse IgG/PE-CY5肌动蛋白结合蛋白CORO1A抗体0.2ml
Goat Anti-Mouse IgG/PE-Cy5.5肌动蛋白结合蛋白DOC6抗体0.2ml
Goat Anti-Mouse IgG/PE-Cy7肌动蛋白结合蛋白Fascin3抗体0.2ml
Goat Anti-Mouse IgG/RBITC肌动蛋白结合蛋白Fascin抗体0.2ml
Goat Anti-Mouse IgM肌动蛋白结合蛋白Girdin抗体0.1ml
Goat anti-Mouse IgM whole serum肌动蛋白结合蛋白LIM3抗体0.2ml
Goat Anti-Mouse IgM/Alexa Fluor 350肌动蛋白结合蛋白LIM蛋白3抗体0.2ml
Goat Anti-Mouse IgM/Alexa Fluor 488肌动蛋白结合蛋白Z盘状蛋白抗体0.2ml
Goat Anti-Mouse IgM/Alexa Fluor 555肌动蛋白解聚因子19抗体0.1ml
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