工作原理
一、人抗肾小球基底膜抗体(GBM)elisa试剂盒实验原理ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。
操作流程
二、人抗肾小球基底膜抗体(GBM)ELISA试剂盒操作步骤1)取出试剂盒,室温(20-25℃)放置30分钟。
2)分组:取出96孔板,根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数,把剩余的板条继续冷藏处理。分别设标准品组(6个浓度)、空白孔、待测样品组。
3)标准品的稀释:准备小试管6 只,依次编好号码,先在各小试管中加入标准品稀释液100ul,然后取原浓度标准品100ul加入一只已编好号的试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第二支试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul加入第三只试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第四只试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul加入第五只试管中,充分混匀;然后在该试管中取100ul,弃掉。第六只试管作为0 号标准品。
注:为减少实验误差,保证准确性,建议设置复孔。
4)加样:依照标准品的顺序分别加入50ul的标准品溶液于空白微孔中;空白对照孔加入50ul的蒸馏水;其余微孔中先加样品40ul然后再加生物素标记的抗体10ul。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
5)温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
6)洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒弃去,如此重复5 次,拍干。
7)加酶标溶液:标准品组、待测样本组各孔中加入50ul的酶标溶液(空白对照孔除外)。
8)温育:酶标板用封板纸密封后,放入湿盒内于37℃恒温孵育1小时。
9)洗板:用稀释后的洗涤液注满每孔,静置15-30s,充分清洗酶标板5次,用吸水纸彻底拍干。
10)显色:各孔加入显色剂A液50ul后,再加入显色剂B液50ul。
11)终止:25-37℃下避光反应10-15分钟,加入50ul终止液。
12)读板:在450nm波长读取各孔的OD值。
注:读板时必须拭干板底残留的液体和手指痕迹,读板时间控制在终止反应后的30分钟内,以免影响准确性。
性能特点
三、人抗肾小球基底膜抗体(GBM)ELISA试剂盒的四大特性
1.特异性强:不与其它细胞因子反应。
2.重复性好:板内、板间变异系数均小于10%。
3.稳定性高:实验效果很稳定。
4.超灵敏度:Z小的检测浓度小于1号标准品,稀释度和样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
四、客户收集样品要求
•客户需提供待检测抗体和包被用抗原。
•检测的样本为细胞培养上清、人和动物的血清、血浆。
•样本收集后应立即-20℃保存,若长期保存应-70℃。
•样本量的要求:若一个指标做复孔检测应不少于250ul,做单孔检测应不少于120ul。建议若客户样本量充足Z好提供500ul以上。
•客户的样本收集后,立即按要求保存,切忌反复冻融。外地客户邮寄需要用干冰运输。邮寄前请与技术支持沟通确认。
五、数据计算以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,即为样品的实际浓度。
标本要求
六、Elisa试剂盒标本要求
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 YZ辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
七.保存条件及有效期1.试剂盒保存:2-8℃
2.有效期:6个月
订购流程
八、人抗肾小球基底膜抗体(GBM)ELISA试剂盒订货说明1)卖方确保所订产品与目录技术指标保持一致;
2)为了确保买方产品在运输中的质量,对有特殊要求的低温产品予以湿冰运输。
3)收到货物后如出现质量问题,买方需在收到货物一个月内向卖方提出书面异议。买方逾期不提出异议,视为货物符合其要求,卖方不付任何责任。
4)出现质量以外的问题,如破损等,买方应在收货后一个周内提出。买方未按时提出异议,视为该产品合格。
本公司对所有售出的产品保证质量,并提供良好的售后服务,有关产品质量的投诉,请在收到货物的32天内以书面形式提出,并向我公司技术人员提供相应的材料,我们会及时派人解决。所有形式的赔偿或退换于产品本身,不涉及其他间接内容。凡购买本公司任意款elisa试剂盒,均可享受免费代测服务,并提供技术指导。