人免疫球蛋白A(IgA)ELISA试剂盒洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此重复5 次,拍干。
工作原理
一、“人免疫球蛋白A(IgA)elisa试剂盒”实验原理
用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗C3抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗C3抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成的黄色。颜色的深浅和样品中的C3呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
二、“人免疫球蛋白A(IgA)elisa试剂盒”的四大特性
1.特异性强:不与其它细胞因子反应。
2.重复性好:板内、板间变异系数均小于10%。
3.稳定性高:实验效果很稳定。
4.超灵敏度:Z小的检测浓度小于1号标准品,稀释度和样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
操作流程
三、“人免疫球蛋白A(IgA)ELISA试剂盒”具体操作方法
以双抗体夹心法为例展示:
1、双抗体夹心法检测抗原
操作步骤如下:
1)将特异性抗体与固相载体结合,形成固相抗体。洗涤除去尚未结
合的抗体及一些杂质。
2)加入待测标本,保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合,形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。
3)加酶标抗体,保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。
4)加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。通过比色,测知标本中抗原的量。在临床检验中,此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原,例如 HBeAg、HBsAg、hCG 、AFP等。只要获得针对受检抗原的特异性抗体,就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。如抗体的来源为抗血清,包被和酶标所使用的抗体Z好分别取自不同种属的动物。如应用单克隆抗体,一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗,分别用于包被固相载体和制备酶结合物。这种双位点夹心法具有很高的特异性,而且可以将受检标本和酶标抗体一起保温反应,作一步检测。
在一步法测定中,当标本中受检抗原的含量很高时,过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合,而不再形成"夹心复合物"。类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象,此时反应后显色的吸光值(位于抗原过剩带上)与标准曲线(位于抗体过剩带上)某一抗原浓度的吸光值相同,如按常法测读,所得结果将低于实际的含量,这种现象被为钩状效应(hook effect),因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落。钩状效应严重时,反应甚至可不显色而出现假阴性结果。因此在使用一步法试剂测定标本中含量可异常ZG的物质(例如血清中 HBsAg、AFP 和尿液 hCG 等)时,应注意可测范围的值。用高亲和力的单克隆抗体制备此类试剂可削弱钩状效应。
四、正确操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件
1. 加样后及时放人孵箱,标本较多时,要分批操作。按说明步骤严格控制操作时间,防止孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗彻底。
2. 显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用。
3. 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
4. 合理安排检测量,以免反应板过多造成洗板等待时间长。
五、Elisa试剂盒组成
1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶
2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品(480ng/L) 0.5ml×1 瓶
3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶
4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份
5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张
6 显色剂B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个
标本要求
六、Elisa试剂盒标本要求
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 YZ辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
七、操作步骤
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
240ng/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液
120ng/L 4 号标准品 150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液
60ng/L 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液
30ng/L 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液
15ng/L 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液:将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此重复5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15 分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液后15 分钟以内进行。
客户好评
八、来自同济大学魏老师对我司“人免疫球蛋白A(IgA)ELISA试剂盒”的使用感言
同济大学魏老师说,次知道【上海沪鼎生物科技有限公司】是在百度上查产品看见的,后来才知道他们同校的齐老师有过在我司选购产品的经验,先在在齐老师那里打听一二才决定在我司咨询产品的。从魏老师次在我司购买产品到现在差不多有六年多的时间,期间一直都在我司选购ELISA试剂盒产品,对我司产品客服以及销售模式都非常了解,昨日魏老师来电咨询产品就和我司业务经理聊起了对我司ELISA试剂盒的使用感言以及建议!
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