转化生长因子,人转化生长因子αELISA试剂盒_详细资料

产品信息

人转化生长因子α(TGF-α)ELISA试剂盒适用于检测体外培养的细胞分泌性成份。用无菌管收集细胞上清液，以1000×g离心15分钟，收集上清。

工作原理
一．人转化生长因子α(TGF-α)elisa试剂盒实验原理
ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。
二．实验材料与试剂配制
1.仪器与材料：酶标仪（使用前预热30分钟），微量加液器、吸头、蒸馏水或去离子水，滤纸。
2. 洗液的配制：按1:30的比例配制洗液备用。
标本要求
三．人转化生长因子α(TGF-α)ELISA试剂盒样品收集、处理及保存
1）.细胞培养上清：
适用于检测体外培养的细胞分泌性成份。用无菌管收集细胞上清液，以1000×g离心15分钟，收集上清。
2）细胞：
用PBS反复洗涤细胞3次，调整细胞浓度达到104-106/ml 左右，通过反复冻融，使细胞破坏并放出细胞内成份，或者细胞超声粉碎，离心取上清液检测。
3）血清：
在室温下，血液自然凝固，以1000×g离心15分钟，取上清待测。
4）血浆：
应根据标本的要求选择EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合后静置10-20 分钟后，以1000×g离心15分钟，收集上清。
5）体液：
包括胸腹水、脑脊液，分泌物等。使用不含热原和内毒素的离心管收集，以1000×g离心15分钟，收集上清。
6.）组织标本：
切取组织标本，称取重量0.5mg，加入500ul 的PBS，用手工或匀浆器，或超声破碎仪将标本匀浆，以2000-3000 rmp离心20 分钟，收集上清进行检测。
样品中不能含有NaN3，因NaN3 YZ辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
7）保存：
如果样品不能立即检测，应将其分装，-70 ℃保存，避免反复冷冻。保存过程中如出现沉淀，应再次离心。血液标本尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
四．ELISA 技术的-操作要点
优质的试剂，良好的仪器和正确的操作是保证ELISA 检测结果准确可靠的必要条件。ELISA 的操作因固相载体的形成不同而有所差异，国内医学检验一般均用板式点。本文将叙述板式ELISA 各个操作步骤的注意要点，珠式、管式及磁性球ELSIA，国外试剂均与特殊仪器配合应用，两者均有详细的使用说明，严格遵照规定操作，必能得出准确的结果。
标本的采取和保存
可用作 ELISA 测定的标本十分广泛，体液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、粪便)等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定(如血清、尿液)，有些则需经预处理(如粪便和某些分泌物)。大部分ELISA 检测均以血清为标本。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外，其他成份均同等于血清。制备血浆标本需借助于抗凝剂，而血清标本只要待血清自然凝固、血块收缩后即可取得。除特殊情况外，在医学检验中均以血清作为检测标本。在ELISA 中血浆和血清可同等应用。
血清标本可按常规方法采集，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP 为标记的ELISA 测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。
血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性 HRP，也会产生假阳性反应。如在冰箱中保存过久，其中的可发生聚合，在间接法 ELISA 中可使本底加深。
一般说来，在 5 天内测定的血清标本可放置于4℃，超过一周测定的需低温冰存。冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡，可上下颠倒混和，不要在混匀器上强烈振荡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存。保存血清自采集时就应注意无菌操作，也可加入适当防腐剂。
五．数据计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，即为样品的实际浓度。
注意事项
六．人转化生长因子α(TGF-α)ELISA试剂盒注意事项
1）实验操作中必须使用一次性吸头，避免交叉污染。
2）加样：加样时，要控制加样速度，避免孔与一孔间的时间间隔过大，否则将会导致不同的预孵育时间，从而影响实验的准确性以及重复性。
3）孵育：严格按照说明书上规定的孵育时间和温度进行。
反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化，如果颜色较深，请提前加入终止液终止反应。
4）建议实验前预测样品含量，如样品浓度过高，应对样品进行稀释，计算结果时乘以相应的稀释倍数。
5）建议使用本试剂盒时先做预实验（即先做标准曲线，SY几个标本），如果对本试剂盒有任何疑问，可和所购经销商联系，如果因运输过程导致试剂盒失效，可要求调换，但概不承担产品本身以外的任何损失。
七．保存条件及有效期
1.试剂盒保存：2-8℃
2.有效期：6个月
订购流程
八．人转化生长因子α(TGF-α)ELISA试剂盒订货说明
1）卖方确保所订产品与目录技术指标保持一致；
2）为了确保买方产品在运输中的质量，对有特殊要求的低温产品予以湿冰运输。
3）收到货物后如出现质量问题，买方需在收到货物一个月内向卖方提出书面异议。买方逾期不提出异议，视为货物符合其要求，卖方不付任何责任。
4）出现质量以外的问题，如破损等，买方应在收货后一个周内提出。买方未按时提出异议，视为该产品合格。
本公司对所有售出的产品保证质量，并提供良好的售后服务，有关产品质量的投诉，请在收到货物的32天内以书面形式提出，并向我公司技术人员提供相应的材料，我们会及时派人解决。所有形式的赔偿或退换于产品本身，不涉及其他间接内容。凡购买本公司任意款elisa试剂盒，均可享受免费代测服务，并提供技术指导。

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