鸡流行性乙型脑炎抗体IgG(JE IgG)ELISA试剂盒用抗人IgM作为二抗,间接测定IgM抗体,必须先将标本用A蛋白或抗IgG抗体处理,以除去IgG的干扰。在临床检验中测定抗体IgM时多采用捕获包被法。
产品资料
elisa试剂盒详细资料中文名称:鸡抗凝血酶Ⅲ抗体(AT-Ⅲ)elisa试剂盒
组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。
规 格:96T/48T
性 状:液体
保 存:2-8℃
有 效 期:6个月
试剂的准备之结果判断竞争法
在竞争法 ELISA 中,阴性孔呈色深于阳性孔。阴性呈色的强度取决于反应中酶结合物的浓度和加入竞争YZ物的量,一般调节阴性对照的吸光度在 1.0-1.5 之间,此时反应Z为敏感。竞争法 ELISA 不易用自视判断结果,因肉眼很难辨别弱阳性反应与阴性对照的显色差异,一般均用比色计测定,读出S、P 和N 的吸光值。计算方法主要也有两种,即阳性判定值法和YZ率法。
a. 阳性判定值法
与间接法和夹心法中的阳性判定值法基本相同,但在计算公式中引入阳性对照 A 值,现举某种检测抗HBc 的试剂盒为例。试剂盒中的阴性对照为不含抗HBc 的复钙人血浆,阳性对照中抗HBc 含量为125±100u/ml。每次试验设2 个阳性对照和3 个阴性对照。测得A 值后,先计算阴性对照A 值的平均值(NC X )和阳性对照A 值的平均数(PCX),两个平均数的差(N-P)必须大于一个特定的数值(例如0.300),试验才有效。3 个阴性对照 A 值均应小于2.000,而且应≥0.5×NCX 并≤1.5×NCX,如其中之一超出此范围,则弃去,而以另2 个阴性对照重新计算×NCX;如有2 个阴性对照A 超出以上范围,则该次实验无效。阳性
判定值按下式计算:
阴性判定值=0.4×NCX+0.6×PCX
标本 A 值≤阳性判定值的反应为阳性,A>阳性判定值的反应为阴性。
b. YZ率法
YZ率表示标本在竞争结合中标本对阴性反应显色的YZ程度,按下式计算:
YZ率(%)= (阴性对照A 值-标本A 值)×/阴性对照A 值一般规定YZ率≥50%为阳性,<50%为阴性。
产品选型
鸡抗凝血酶Ⅲ抗体(AT-Ⅲ)ELISA试剂盒的类型
ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。在这种测定方法中有三个必要的试剂:(1)固相的KJ素原或抗体,即"免疫吸附剂"(immunosorbent);(2)酶标记的抗原或抗体,称为"结合物"(conjugate);(3)酶反应的底物。根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件,可设计出各种不同类型的检测方法。用于临床检验的ELISA主要有以下几种类型:
捕获包被法测抗体
IgM抗体的检测用于传染病的早期诊断中。间接法ELISA一般仅适用于检测总抗体或IgG抗体。如用抗原包被的间接法直接测定IgM抗体,因标本中一般同时存在较高浓度的IgG抗体,后者将竞争结合固相抗原而使一部份IgM抗体不能结合到固相上。因此如用抗人IgM作为二抗,间接测定IgM抗体,必须先将标本用A蛋白或抗IgG抗体处理,以除去IgG的干扰。在临床检验中测定抗体IgM时多采用捕获包被法。先用抗人IgM抗体包被固相,以捕获血清标本中的IgM(其中包括针对抗原的特异性IgM抗体和非特异性的IgM)。然后加入抗原,此抗原仅与特异性IgM相结合。继而加酶标记针对抗原的特异性抗体。再与底物作用,呈色即与标本中的IgM成正相关。此法常用于病毒性感染的早期诊断。甲型肝炎病毒(HAV)抗体的检测模式见图。
类风湿因子(RF)同样能干扰捕获包被法测定IgM抗体,导致假阳性反应。因此中和IgG的间接法近来颇受青睐,用这类试剂检测抗CMV IgGM和抗弓形虫IgM抗体已获成功。
注意事项
鸡分泌型免疫球蛋白A(SIgA)ELISA试剂盒操作注意事项
(1)试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
(2)实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
(3)不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
(4)使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
(5)使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
(6)洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
(7)底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
(8)加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
(9)按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。