中文名称:兔子补体蛋白4(C4)ELISA试剂盒运输:泡沫箱加冰运输,安全便捷。。江浙沪隔天可到,其他地区3-5天到货。检测标本:血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。
工作原理
一.兔子补体蛋白4(C4)elisa试剂盒实验原理
ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。
应用领域
二.试剂的准备之结果判断竞争法
在竞争法 ELISA 中,阴性孔呈色深于阳性孔。阴性呈色的强度取决于反应中酶结合物的浓度和加入竞争YZ物的量,一般调节阴性对照的吸光度在 1.0-1.5 之间,此时反应Z为敏感。竞争法 ELISA 不易用自视判断结果,因肉眼很难辨别弱阳性反应与阴性对照的显色差异,一般均用比色计测定,读出S、P 和N 的吸光值。计算方法主要也有两种,即阳性判定值法和YZ率法。
a. 阳性判定值法
与间接法和夹心法中的阳性判定值法基本相同,但在计算公式中引入阳性对照 A 值,现举某种检测抗HBc 的试剂盒为例。试剂盒中的阴性对照为不含抗HBc 的复钙人血浆,阳性对照中抗HBc 含量为125±100u/ml。每次试验设2 个阳性对照和3 个阴性对照。测得A 值后,先计算阴性对照A 值的平均值(NC X )和阳性对照A 值的平均数(PCX),两个平均数的差(N-P)必须大于一个特定的数值(例如0.300),试验才有效。3 个阴性对照 A 值均应小于2.000,而且应≥0.5×NCX 并≤1.5×NCX,如其中之一超出此范围,则弃去,而以另2 个阴性对照重新计算×NCX;如有2 个阴性对照A 超出以上范围,则该次实验无效。阳性
判定值按下式计算:
阴性判定值=0.4×NCX+0.6×PCX
标本 A 值≤阳性判定值的反应为阳性,A>阳性判定值的反应为阴性。
b. YZ率法
YZ率表示标本在竞争结合中标本对阴性反应显色的YZ程度,按下式计算:
YZ率(%)= (阴性对照A 值-标本A 值)×/阴性对照A 值一般规定YZ率≥50%为阳性,<50%为阴性。
标本要求
三.兔子补体蛋白4(C4)ELISA试剂盒样品收集、处理及保存
1).细胞培养上清:
适用于检测体外培养的细胞分泌性成份。用无菌管收集细胞上清液,以1000×g离心15分钟,收集上清。
2)细胞:
用PBS反复洗涤细胞3次,调整细胞浓度达到104-106/ml 左右,通过反复冻融,使细胞破坏并放出细胞内成份,或者细胞超声粉碎,离心取上清液检测。
3)血清:
在室温下,血液自然凝固,以1000×g离心15分钟,取上清待测。
4)血浆:
应根据标本的要求选择EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合后静置10-20 分钟后,以1000×g离心15分钟,收集上清。
5)体液:
包括胸腹水、脑脊液,分泌物等。使用不含热原和内毒素的离心管收集,以1000×g离心15分钟,收集上清。
6.)组织标本:
切取组织标本,称取重量0.5mg,加入500ul 的PBS,用手工或匀浆器,或超声破碎仪将标本匀浆,以2000-3000 rmp离心20 分钟,收集上清进行检测。
样品中不能含有NaN3,因NaN3 YZ辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
7)保存:
如果样品不能立即检测,应将其分装,-70 ℃保存,避免反复冷冻。保存过程中如出现沉淀,应再次离心。血液标本尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
操作流程
四.兔子补体蛋白4(C4)ELISA试剂盒操作步骤
1)取出试剂盒,室温(20-25℃)放置30分钟。
2)分组:取出96孔板,根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数,把剩余的板条继续冷藏处理。分别设标准品组(6个浓度)、空白孔、待测样品组。
3)标准品的稀释:准备小试管6 只,依次编好号码,先在各小试管中加入标准品稀释液100ul,然后取原浓度标准品100ul加入一只已编好号的试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第二支试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul加入第三只试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第四只试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul加入第五只试管中,充分混匀;然后在该试管中取100ul,弃掉。第六只试管作为0 号标准品。
注:为减少实验误差,保证准确性,建议设置复孔。
4)加样:依照标准品的顺序分别加入50ul的标准品溶液于空白微孔中;空白对照孔加入50ul的蒸馏水;其余微孔中先加样品40ul然后再加生物素标记的抗体10ul。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
5)温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
6)洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒弃去,如此重复5 次,拍干。
7)加酶标溶液:标准品组、待测样本组各孔中加入50ul的酶标溶液(空白对照孔除外)。
8)温育:酶标板用封板纸密封后,放入湿盒内于37℃恒温孵育1小时。
9)洗板:用稀释后的洗涤液注满每孔,静置15-30s,充分清洗酶标板5次,用吸水纸彻底拍干。
10)显色:各孔加入显色剂A液50ul后,再加入显色剂B液50ul。
11)终止:25-37℃下避光反应10-15分钟,加入50ul终止液。
12)读板:在450nm波长读取各孔的OD值。
注:读板时必须拭干板底残留的液体和手指痕迹,读板时间控制在终止反应后的30分钟内,以免影响准确性。
五.正确操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件
1. 加样后及时放人孵箱,标本较多时,要分批操作。按说明步骤严格控制操作时间,防止孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗彻底。
2. 显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用。
3. 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
4. 合理安排检测量,以免反应板过多造成洗板等待时间长。
注意事项
六.兔子补体蛋白4(C4)ELISA试剂盒注意事项
1)实验操作中必须使用一次性吸头,避免交叉污染。
2)加样:加样时,要控制加样速度,避免孔与一孔间的时间间隔过大,否则将会导致不同的预孵育时间,从而影响实验的准确性以及重复性。
3)孵育:严格按照说明书上规定的孵育时间和温度进行。
反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化,如果颜色较深,请提前加入终止液终止反应。
4)建议实验前预测样品含量,如样品浓度过高,应对样品进行稀释,计算结果时乘以相应的稀释倍数。
5)建议使用本试剂盒时先做预实验(即先做标准曲线,SY几个标本),如果对本试剂盒有任何疑问,可和所购经销商联系,如果因运输过程导致试剂盒失效,可要求调换,但概不承担产品本身以外的任何损失。
产品特点
七.质量管理
ELISA 是一种敏感性高、特异性强、重复性好的实验诊断方法,由于其试剂稳定、易保存、操作简便、结果判断较客观等因素,以及既适宜于大规模筛查试验又可以用于少量标本的检测,既可以做定性试验也可以做定量分析等优点,已广泛应用于微生物学、寄生虫学、肿瘤学和细胞因子等领域。ELISA 的影响因素较多,加强质量管理才能充分发挥其方法学的优点。
分析前质控
●人员培训 实验是人操作的,因此检验人员需经过培训,熟练掌握本专业如下几方面的技术知识:
◎检验项目的基本原理 (ELISA 原理);
◎临床意义;
◎熟悉检测技巧,了解易出差错的环节及难点;
◎熟悉检测试剂性能(包括试剂盒组成,包被片段及其组成);
◎ 熟悉检测仪器的原理及性能;掌握数据处理的能力和质量控制知识。
◎某些特殊项目的检测如抗 HIV 等需经有关部门组织的专门培训班,考试合格后持证上岗。
分析前质控
◎ELISA 原理:1971 年Engvall 等人把免疫组化的EIA 技术应用于临床检验发展为ELISA 技术。
特点 :在固相表面组装免疫活性物质形成"免疫吸附剂"
酶标记免疫活性物质,进行信号放大;
有二步温育反应二次洗涤过程;
灵敏度特异性相对较高。
局限性:只能检测到 ng 水平
精密度差(批内CV15-20%);
线性范围窄(一个数量级);
存在"HD-HOOK"效应。
订购流程
八.兔子补体蛋白4(C4)ELISA试剂盒订货说明
1)卖方确保所订产品与目录技术指标保持一致;
2)为了确保买方产品在运输中的质量,对有特殊要求的低温产品予以湿冰运输。
3)收到货物后如出现质量问题,买方需在收到货物一个月内向卖方提出书面异议。买方逾期不提出异议,视为货物符合其要求,卖方不付任何责任。
4)出现质量以外的问题,如破损等,买方应在收货后一个周内提出。买方未按时提出异议,视为该产品合格。
本公司对所有售出的产品保证质量,并提供良好的售后服务,有关产品质量的投诉,请在收到货物的32天内以书面形式提出,并向我公司技术人员提供相应的材料,我们会及时派人解决。所有形式的赔偿或退换于产品本身,不涉及其他间接内容。凡购买本公司任意款elisa试剂盒,均可享受免费代测服务,并提供技术指导。