“植物25羟基维生素D3(25HVD3)ELISA试剂盒”的使用目的:本试剂盒用于测定血清、血浆及相关液体样本中产品含量。其它相关说明书请咨询我司在线人员或业务人员!
产品资料
产品资料:植物25羟基维生素D3(25HVD3)elisa试剂盒
规 格 (48T/96T)
样品类型 血清、血浆、细胞培养上清等样品类型
检测方法 酶联免疫法
特 异 性 公司elisa试剂盒具有较高的灵敏度和出色的特异性
交叉反应 由于当前的酶联免疫科学技术和知识有限,现有技术不可能完成药物检测的靶抗原之间和所有其他物种的类似物。因此,交叉反应可能仍然存在
样 本 量 50-100 μL
实验时间 1–4.5h
储存条件 2-8°C
储存方法 可以存储在2 - 8°C长达1个月(专家建议:4°C恒温保存,酶免试剂盒实验效果更佳)。对于长期存储,请在-20°C的存储。尽量保持试验板在密封铝箔袋,避免潮湿
有 效 期 6 months
工作原理
植物25羟基维生素D3(25HVD3)ELISA试剂盒质量管理
ELISA 是一种敏感性高、特异性强、重复性好的实验诊断方法,由于其试剂稳定、易保存、操作简便、结果判断较客观等因素,以及既适宜于大规模筛查试验又可以用于少量标本的检测,既可以做定性试验也可以做定量分析等优点,已广泛应用于微生物学、寄生虫学、肿瘤学和细胞因子等领域。ELISA 的影响因素较多,加强质量管理才能充分发挥其方法学的优点。
分析前质控
●人员培训 实验是人操作的,因此检验人员需经过培训,熟练掌握本专业如下几方面的技术知识:
◎检验项目的基本原理 (ELISA 原理);
◎临床意义;
◎熟悉检测技巧,了解易出差错的环节及难点;
◎熟悉检测试剂性能(包括试剂盒组成,包被片段及其组成);
◎ 熟悉检测仪器的原理及性能;掌握数据处理的能力和质量控制知识。
◎某些特殊项目的检测如抗 HIV 等需经有关部门组织的专门培训班,考试合格后持证上岗。
分析前质控
◎ELISA 原理:1971 年Engvall 等人把免疫组化的EIA 技术应用于临床检验发展为ELISA 技术。
特点 :在固相表面组装免疫活性物质形成"免疫吸附剂"
酶标记免疫活性物质,进行信号放大;
有二步温育反应二次洗涤过程;
灵敏度特异性相对较高。
局限性:只能检测到 ng 水平
精密度差(批内CV15-20%);
线性范围窄(一个数量级);
存在"HD-HOOK"效应。
应用领域
植物25羟基维生素D3(25HVD3)ELISA试剂盒的类型
ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。在这种测定方法中有三个必要的试剂:(1)固相的KJ素原或抗体,即"免疫吸附剂"(immunosorbent);(2)酶标记的抗原或抗体,称为"结合物"(conjugate);(3)酶反应的底物。根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件,可设计出各种不同类型的检测方法。用于临床检验的ELISA主要有以下几种类型:
双抗体夹心法测抗原
操作流程
双抗体夹心法是检测抗原Z常用的方法,操作步骤如下:
(1) 将特异性抗体与固相载体联结,形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。
(2) 加受检标本,保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合,形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。
(3) 加酶标抗体,保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。
(4) 加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。通过比色,测知标本中抗原的量。在临床检验中,此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原,例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要获得针对受检抗原的异性抗体,就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。如抗体的来源为抗血清,包被和酶标用的抗体Z好分别取自不同种属的动物。如应用单克隆抗体,一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗,分别用于包被固相载体和制备酶结合物。这种双位点夹心法具有很高的特异性,而且可以将受检标本和酶标抗体一起保温反应,作一步检测。
在一步法测定中,当标本中受检抗原的含量很高时,过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合,而不再形成"夹心复合物"。类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象,此时反应后显色的吸光值(位于抗原过剩带上)与标准曲线(位于抗体过剩带上)某一抗原浓度的吸光值相同(参见1.3.2,图1-4),如按常法测读,所得结果将低于实际的含量,这种现象被称为钩状效应(hook effect),因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落。钩状效应严重时,反应甚至可不显色而出现假阴性结果。因此在使用一步法试剂测定标本中含量可异常ZG的物质(例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等)时,应注意可测范围的值。用高亲和力的单克隆抗体制备此类试剂可削弱钩状效应。
假使在被测分子的不同位点上含有多个相同的决定簇,例如HBsAg的a决定簇,也可用针对此决定的同一单抗分别包被固相和制备酶结合物。但在HBsAg的检测中应注意亚型问题,HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4个亚型,虽然每种亚型均有相同的a决定簇的反应性,这也是用单抗作夹心法应注意的问题。
双抗体夹心法测抗原的另一注意点是类风湿因子(RF)的干扰。RF是一种自身抗体,多为IgM型,能和多种动物IgG的Fc段结合。用作双抗体夹心法检测的血清标本中如含有RF,它可充当抗原成份,同时与固相抗体和酶标抗体结合,表现出假阳性反应。采用F(ab')或Fab片段作酶结合物的试剂,由于去除了Fc段,从而消除RF的干扰。双抗体夹心法ELISA试剂是否受RF的影响,已被列为这类试剂的一项考核指标。
双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原,但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原,因其不能形成两位点夹心。
标本要求
植物25羟基维生素D3(25HVD3)ELISA试剂盒样品要求
•客户需提供待检测抗体和包被用抗原。
•检测的样本为细胞培养上清、人和动物的血清、血浆。
•样本收集后应立即-20℃保存,若长期保存应-70℃。
•样本量的要求:若一个指标做复孔检测应不少于250ul,做单孔检测应不少于120ul。建 议若客户样本量充足Z好提供500ul以上。
•客户的样本收集后,立即按要求保存,切忌反复冻融。外地客户邮寄需要用干冰运输。邮寄前请与技术支持沟通确认。
主要优点
植物25羟基维生素D3(25HVD3)ELISA试剂盒的优点体现:
·特异性高:进行了广泛的非特异性排查,避免了由于交叉反应和干扰导致的实验数据误差。
·精 度 高:通过加标回收率和线性稀释实验,确保样本值的准确性,精确度高于同类产品(较低的CV%)。
·重复性好:lot-to-lot检测确保Z小的批间差异。
·可靠性强:经优化的试剂盒组分可有效的阻止假阳性和假阴性试验结果。
·标准曲线:在保证JZ数据的前提下提供较宽的检测范围,以满足需求。
·价格低廉:原装进口RD试剂,国内分装配置,大大减少了客户因为价格高而必须购买国产试剂盒的顾虑。
注意事项
【植物25羟基维生素D3(25HVD3)ELISA试剂盒】操作注意事项
(1)试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
(2)实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
(3)不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
(4)使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
(5)使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
(6)洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
(7)底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
(8)加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
(9)按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。