菜豆凝集素(PHA)ELISA试剂盒是以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的实验技术。
产品资料
产品名称:菜豆凝集素(PHA)elisa试剂盒
产品规格:96人份/48人份
各种种属:人、大小鼠、豚鼠、兔子、猪、犬、牛、羊…
标本齐全:血清、血浆、细胞培养上清液、组织匀浆、组织液、关节液、胸腔溢液等…
保存条件及有效期
1.试剂盒保存:2-8℃。
2.有效期:6个月
运输条件:低温运输,用干冰或者冰袋低温运输。
工作原理
ELISA试剂盒检测概述
ELISA(酶联接免疫吸附反应分析)是以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的GX催化作用相结合起来的一种敏感性很高的实验技术。 由于抗原、抗体的反应在一种固相载体-聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行,每加入一种试剂孵育后,可通过洗涤除去多余的游离反应物,从而保证试验结果的特异性与稳定性。
实际应用中,通过不同的设计,具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。目前我们对客户提供比较常用的ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法服务。
注意事项
菜豆凝集素(PHA)ELISA试剂盒注意事项如下:
1.正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
2.在ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1)固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2)包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18~24小时。蛋白质包被的Z适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值而蛋白量Z少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3)酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4)酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。
操作流程
菜豆凝集素(PHA)ELISA试剂盒的YZ性测定法操作步骤
本法首先是将特异性抗体a包被于固相载体,经洗涤加入含有欲测抗原之待检样品。经孵育洗涤后再加一次未标记的特异性抗体b,而这次加入的抗体b于次包被于固相载体上的特异性抗体a对被测抗原来说都是特异性的,但不是用同种动物免疫制备的,否则可出现非特异性反应。经孵育洗涤后,再加酶标记抗b抗体,再经孵育洗涤后加底物显色进行测定。这种方法与双抗体夹心法不同之处是多加了一层抗体。因此,放大的倍数更高,故比双抗体夹心法更加灵敏。同时避免标记特异性抗体,而另一优点是只要标记一种抗抗体,即可达到多种应用。
用于测定抗原的尚有第4种叫做YZ性测定法(见图),它是先用抗原包被固相载体,然后分为二组,一组加入用参考抗体和被检标本混合孵育后的混合溶液,假如标本中不含抗原,则参考抗体未被结合。因此它可以和包被于固相载体上的抗原结合。如标本中含有抗原,则抗原先与参考抗体结合,故参考抗体不再与包被于固相载体上的抗原结合。对加入酶结合物(抗球蛋白)和底物仅显示剩余结合的抗体量。再与另一组不加待检标本的参考系统比较,被检标本对底物显色的YZ程度与标本中所含抗原量成比例,二者之差,即为欲测抗原的量。
被检标本对底物显色的YZ程度与标本中所含抗原的量成比例,二者之差即为欲测抗原的量。
常见问题
定量测定
ELSIA操作步骤复杂,影响反应因素较多,特别是固相载体的包被难达到各个体之间的一致,因此在定量测定中,每批测试均须用一系列不同浓度的参考标准品在相同的条件下制作标准曲线。测定大分子量物质的夹心法ELISA,标准曲线的范围一般较宽,曲线点的吸光度可接近2.0,绘制时常用半对数纸,以检测物的浓度为横坐标,以吸光度为纵坐标,将各浓度的值逐点连接,所得曲线一般呈S形,其头、尾部曲线趋于平坦,ZY较呈直线的部分是Z理想的检测区域。
Elisa定性测定
定性测定的结果判断是对受检标本中是否含有待测抗原或抗体作出"有"或"无"的简单回答,分别用"阳性"、"阴性"表示。"阳性"表示该标本在该测定系统中有反应。"阴性"则为无反应。用定性判断法也可得到半定量结果,即用滴度来表示反应的强度,其实质仍是一个定性试验。在这种半定量测定中,将标本作一系列稀释后进行试验,呈阳性反应的稀释度即为滴度。根据滴度的高低,可以判断标本反应性的强弱,这比观察不稀释标本呈色的深浅判断为强阳性、弱阳性更具定量意义。
客户好评
销售客户评价案例
劲马客户遍及全国各地,包括:中科院、北京生命科学研究院、北京大学、清华大学、复旦大学、华西医科大学、北京师范大学、华中科技大学等高校及研究机构。
华中科技大学同济医学院-陈老师
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评语:贵公司产品便捷、有效,板内重复性好,所提供试剂也足够多次实验, 对实验很有帮助!
发表文章:Ethyl pyruvate attenuates murine allergic rhinitis partly by decreasing high mobility group box 1 release, Experimental Biology and Medicine, 2015.
重庆大学-刘老师
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评语:劲马ELISA试剂盒重复性好,板间差异小。而且设定了的检测范围,检测灵敏度高,生产团队专业,质量有保障!
文章:Enzyme responsive mesoporous silica nanoparticles for targeted tumor therapy in vitro and in vivo, Nanoscale, 2015.
四川大学华西医院-刘老师
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评语:我对劲马的ELISA试剂盒总体比较满意,操作步骤简单、产品灵敏性和重复性较好,性价比较高。希望贵公司能推出更多的品种试剂盒。
文章:The effect of chronic stress onanti-angiogenesis of sunitinib in colorectalcancer models, Psychoneuroendocrinology, 2015.
订购流程
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