phospho-RelB(Ser551)抗体,磷酸化转录因子RelB蛋白抗体,应用于IHC、WB、 IF、IP、ELISA等实验,公司生产的抗体每个流程都执行严格的检测标准,保证蛋白抗原产品质量,质量稳定,实验效果明显。按理化性质和生物学功能,可将其分为IgM、IgG、IgA、IgE、IgD五类。公司产品经无数次市场验证,若出
抗体名称:
phospho-RelB(Ser551)抗体,磷酸化转录因子RelB蛋白抗体
规格价格: 0.1ml/100ug 0.2ml/200ug
说 明 书:电询
研究领域:肿瘤 细胞生物 免疫学 信号转导 转录调节因子
抗体来源:Rabbit(兔) 小鼠
克隆类型:Polyclonal 单抗
交叉反应:Human, Mouse, Rat, Chicken, Pig, Cow, Horse,
产品应用:WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:100-500 (石蜡切片需做抗原修复)
not yet tested in other applications.
optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
性 状:Lyophilized or Liquid
浓 度:1mg/1ml
亚 型:IgG
纯化方法:affinity purified by Protein A
储 存 液:0.01M PBS, pH 7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1% Sodium azide
保存条件:Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.贮存于-20℃.
实验室的步骤:1.包被两条Ag远远过量的平行 行
2. 将稀释至极低梯度的McAb(1:40 ,000)与不同浓度也是低浓度(1X10-8M to 5X10-7M)的抗原(Ag)等体积混合,将混合物加至空白孔中在RT平衡18h,使其达到抗原和抗体的平衡状态,此时会在某一孔中就会有游离的抗体存在,亲和力越强的抗体结合的Ag越多,它处于游离状态的就越少
3.将2中的混合物加入1中包被了Ag的孔中,加入HRP显色终止,可以依据公式算出Ka值
实验室指导:脱片的原因可能有以下几点:(1)切片在脱蜡之前没有进行烤片,一般片子在做之前需烤片。 烤片的目的是将带有蜡的组织切片牢固地黏在载玻片上,以免染色过程中切片脱落。切片在56—60℃的恒温箱中至少放置1小时才能达到此目的,但是,通常的烤片温度为;8~60℃,时间为2—6小时。由于高温干燥可加速组织中抗原的氧化,因此高温烤片对抗原有破坏作用;
(2)在贴片前,载玻片处理的不够干净。处理载玻片的步骤:洗涤剂洗-水洗-过酸-水洗-酒精浸泡-晾干-多聚赖氨酸挂片-晾干备用;
(3)粘片剂涂的太少或是粘片剂配得浓度不够。一般用0.1 mg/ml的多聚赖氨酸进行包被。多聚赖氨酸在水溶液中易分解,所以一次不要配太多工作液。配制多聚赖氨酸溶液Z好使用超纯水(每100mL已稀释的多聚赖氨酸溶液要包被的玻片40-90张, 超过90张片子将影响其黏合力),释过的多聚赖氨酸溶液要放在2-8℃,至少在3个月内是稳定的;
(4)展片:一定要展开,尽量等标本完全展平在往载玻片上贴!而且贴的时候不要有气泡,如果展片不好的话,可以多烤一会。掉片也会有是这个原因,特别是标本面积很小的;
(6)切片时尽量要薄(3-5微米),平展不要有皱折,组织块本身不要太大。脂肪组织和软骨组织本身容易脱片;
(7)如果掉片很多的话,可以考虑ihc过程中的每一步水洗时间尽量缩短(在不影响结果的情况下)。
这个实验中如果(phospho-RelB(Ser551)抗体,磷酸化转录因子RelB蛋白抗体)的亲和力越高,OD值就会越低。
亲合力(avidity):affinity总和,还有抗体的价(比如IgG二价,IgM 10价),抗体的浓度,也影响它。这本书原文是Thus, the avidity can be regarded as the average of all the affinity constants for all interactions between the serum and antigen(s) Page17,当我们稀释某一抗体时,他的avidity也变化,但是affinity不会变化,
所以在间接法测定抗体效价时,用Ag铺板与某一浓度的McAb反应的时候,得到的OD值就是某一稀释梯度时的avidity,理论上以这个avidity浓度去包被单抗做夹心法,用一样的Ag和一样的capture antibody(多抗)去测定,得到的od值应该是一样的。
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CpG DNA佐剂
ImmumEasy Mouse Adjuvant是一种专为在小鼠体内制备GX价抗体而设计的新型佐剂,含有免疫诱导剂CpG DNA,这是一种序列中含有特定的未经甲基化的胞嘧啶—鸟嘌呤二核苷酸结构的寡核苷酸,由于这种序列通常存在于细菌DNA中,当进入哺乳动物体内时会被免疫系统识别,并当作是感染的信号而传递,因而会非常迅速地引起强烈的免疫反应。当这种佐剂和抗原混合注射时,CpG DNA诱导产生GX价的抗原特异性抗体。
ImmunEasy Mouse Adjuvant产生的抗体效价往往高于弗氏完全佐剂(Freund's complete adjuvant),而且注射后只需2周即达到免疫应答高峰期(而不是传统的4周);ImmunEasy Mouse Adjuvant所需的抗原量要远远少于常规佐剂所需的抗原量;佐剂本身没有毒性,不会引起副作用;还有一个优点是容易操作,只需加入抗原混合,室温下5—10分钟后即可注射,无需加热、超声波处理、乳化等复杂步骤,也就避免了这些步骤出错而可能引起的问题。
ImmunEasy Mouse Adjuvant可以用于多种形式的抗原,如多肽、可溶蛋白、病毒样颗粒、多醣耦联物、全细胞产物等。由于不同的CpG DNA序列会激活不同的动物,为免疫小鼠而设计的ImmunEasy Mouse Adjuvant只适用于小鼠。由于没有毒性,即使过量使用ImmunEasy Mouse Adjuvant也不会引起受免疫小鼠的中毒症状。