ELISA操作技巧
1.操作前应对实验的物理参数有充分的了解,如环境温度(保持在18 C~25℃)、反应孵育温度和孵育时间、洗涤的次数等,要先查看水育箱温度,ELISA试剂盒是否符合要求。
2.正确使用加样器加样器应垂直加入标本或试剂,避免刮擦包被板底部。加样过程中避免液体外溅,血清残留在反应孔壁上,加样器吸头要清洗干净,避免污染,加样次序要与说明书一致,否则可导致结果错误,实验重复性差。
3.手工洗板加洗液时冲击力不要太大,洗涤次数不要超过说明书推荐的洗涤次数,洗液在反应孑L内滞留的时间不宜太长。不要使洗液在孑L间窜流,造成孔问污染,导致假阴性或假阳性。
4.要保证加液量一致 我们在使用时感觉滴瓶加液不如加样器好,滴瓶不易控制加液量不准,造成显色不统一,判断错误。
5.显色液量不可过多 加样的工作环境不能处于阳光直射的环境下,加显色系统后要避光反应,显色液量不能过多,以免显色过强。
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我司ELISA试剂盒文献引用总数超过1300篇,290余篇SCI文献引用,1100余篇国内核心期刊及博士硕士论文引用。
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劲马ELISA检测试剂盒研发ZX由ZS免疫学技术专家创立,丰富行业经验为您提供品质的ELISA试剂盒。
常见问题
常见问题解答
小编简单整理了5个问题,具体内容如下:
1、一个ELISA试剂盒检测几个样品?
小编自己在各大论坛看到Z多的三个答案:
1)48T 可做42个样本加6个标准曲线;96T 可做90个样本加6个标准曲线
2)以96T试剂盒来算,定量的试剂盒一般可以做90个左右的样品,定性的试剂盒可以做94个左右的样品
3)96T的ELISA试剂盒,去除标准品复孔检测,Z多还能检测80个标本;48T的Z多30个样本。
2、elisa试剂盒96T的能做检测多少血清样品?板能重复利用吗?
96T,一般做复孔的话,做标准曲线需要16个孔,剩下80个孔就可以做40个样本。这个板不能重复利用。而且配套的试剂也只是够一块板子用的。
3、想请教一下,我想用elisa法测血清里的一种抗原,查了资料,发现没有现成的试剂盒用,现在就有2种备选方案,一种是买抗体对自己包被(查了R&D等大公司都没有可用于elisa的单抗)。哪种比较好呢?自己包被的会不会比国产的试剂盒可靠呢?
如果你觉得技术不错有队其他公司不放心,可以自己购买抗体对自己包被,这个就是麻烦点,自己包被用着放心,舒心;
另外国内还是有一些资质不错的公司,如上海劲马,上海恒远,上海沪鼎等等
4、western 和ELISA 处理样本有何差别?
Western Blot 样品制备要加蛋白裂解液(含有蛋白酶YZ剂),然后冰上研磨,收集于EP管,冰上裂解30min,4度12000rpm离心15min,取上清分装,即得到蛋白样品。建议直接电泳,多余的-80保存。建议分装的蛋白每支略多于一次上样量,一次性用完一支,避免反复冻融。
ELISA样品,直接脑组织冰上匀浆,收集于EP管,同上一样离心,大约220-250ul每支分装(因为ELISA上样量基本都是每孔100ul,做复孔,每个样品2孔,就需要200ul,为了避免不够2孔,分装时要大于200ul每支),直接实验。多余的-80保存,一样避免反复冻融。
不过ELISAZ好少量样品进行预实验,或者查阅文献,看看大概组织里有多高浓度,选择合适的试剂盒,测量范围要与组织浓度相符。避免浓度过高测量不准,或者浓度过低,小于试剂盒可测浓度。
5、Elisa试剂盒该买哪家公司的呢?
提出这个问题的朋友其实该打,目前国际上各个品Pai的试剂盒生厂商,都会有其偏ZD,像R&D在细胞因子方面的试剂盒就非常牛逼,而其他Pai子也一样的。
Bender:粘附分子方面的试剂盒;
Cayman:花生四烯酸类产品的试剂盒;
Merck(Linco):内分泌研究方面的试剂盒;
Tips:
1、买Elisa试剂盒时,尽量先查文献,通过文献找品Pai,再找供应商,找供应商就找正规代理商,千万不要去干“赔夫人又折兵”的蠢事。
2、ELISA中,复孔就是同一个样品加到至少两个孔中(一般3个或4个),取其平均值作为样品的读数,这样测得的结果才有说服力!
做复孔是为了较好的较少组内差异,如果血清不足不做复孔也可以。
结果判断与分析
1. 仪器值:于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2. 以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的IFN-Y标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的IFN-Y含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度,再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
3. 检测值范围:0-400pg/ml
4. 敏感度:1.0pg/ml
合作单位
我司合作单位
上海劲马实验设备有限公司先后与河南中医学院、复旦大学、同济大学、上海交通大学、华东师范大学、第二军医大学、仁济医院、曙光医院、华山医院、瑞金医院、上海有机研究所、中科院上海分院、华中科技大学、重庆大学、四川大学华西医院、华南理工大学、杭州市肿瘤医院、北京大学口腔医院、遵义医学院、上海鼎国生物技术有限公司、辽宁中医药大学、山西大学、南华大学附属第二医院、江西中医院大学、ZG农业大学理学院、南通大学、浙江中医药大学、浙江海洋学院、辽宁中医药大学、江苏省血吸虫病FZ研究所、福建省厦门市仙岳医院、郑州大学、浙江大学、国家纳米科学ZX、东曜药业有限公司、延安大学、清华大学、徐州市儿童医院、沈阳农业大学、重庆市中山医院、北京工业大学、苏州大学、扬州大学兽医学院、日照市人民医院、 重庆医科大学 、桂林医学院、河北联合大学、广东药学院附属医院、南昌大学附属医院、ZG农业大学理学院、黑龙江八一农垦大学、右江民族医学院、西安建筑科技大学、河北联合大学、扬州大学兽医学院、中南大学湘雅三医院、济宁医学院、济南格非生物技术有限公司、煤炭总医院、第三军医大学第三附属医院(对外称大坪医院)等众多科研机构。
产品资料
选购ELISA试剂盒需谨慎
昨日我司业务经理接到了来自延安大学吴老师来电咨询产品,电话里吴老师说自己上一次实验买了某公司低价促销试剂盒,结果钱都打水漂了实验很失败,Z重要的是浪费时间所以这次打算购买我司的原装进口产品。在此我司业务经理表示,正规的R&D进口分装ELISA试剂盒,包装上均有厂家信息,有完善的售后服务。现在很多销售假冒R&D进口分装ELISA试剂盒的公司已被R&D公司列入黑名单,客户可以直接登录R&D网站咨询相关信息。
酶联免疫试剂盒操作的通用的规则
1. 要确保微量加样器的准确性,可以使用蒸馏水和电子天平进行确定(由于蒸馏水不含杂质,温度环境为20%左右时,lmL的水可以看作是lg、200 L的水可以看作是0.2g)每一把微量加样器都应该将其量程和量程进行确定。
2. 在使用微量加样器时,吸取不同瓶子中液体后要更换枪头,即使吸取标准品溶液。
3. 吸取液体时速度不易太快,以免产生气泡,吸取的量不够准确。
4. 将液体加到酶标孔中时,避免枪头和孔内液体接触,可使枪头上的液滴和孑L壁接触,液滴会自然流下去。吸入液体时的Z好的方法是吸两档打一档,防止由于枪头的毛细作用
使得部分液体不能流出而造成的误差。
5. 吸取液体时要选用量程和需要量接近的微量加样器吸,减少误差。
6. 液体全部加入酶标孔后,Z好将酶标板放在桌子上平行轻轻摇晃30s,使液体充分混合均匀,也使其得到充分的反应。
7. 孵育时要使盖板膜封好酶标板,防止水分蒸发,以防曲线不成线性。
8. 实验前30min将试剂盒中的所有试剂从冰箱取出,使试剂盒中的所有试剂与提取好的样品溶液的温度相同,酶标板只要取出所需量。
9. 由于底物显色剂对光及其敏感,因此要避光保存。
10. 手工洗板时每次加入洗涤液后。应静置15~30s,不要将一个酶标孑L中的洗涤液溅入另一酶标孔中,防止交叉污染。甩去洗涤液后将酶标板放在毛巾或吸水纸上拍干。
11. 检测吸光度前应将酶标仪打开,将其预热30min以上。
12. 底物为TMB,避免与皮肤相接触。终止液为2tool的浓硫酸具有腐蚀性,应尽量避免接触皮肤。
13. 孵育的时间应该严格按照试剂盒说明书上的时间为准。
14. 要尽量做双孔实验,这样才既能保证数据的准确性,又能反映出试剂盒的精密度。
15. 对样本的结果有疑问时需要使用其他检测方法进行验证。
16. 没有去离子水或双蒸水时,可以使用娃哈哈纯净水配制溶液,切勿使用自来水。
注意事项
注意:
1. 不同厂家生产的试剂盒因生产工艺和操作方法略有不同,务必按照所用试剂盒严格操作,否则容易产生检测结果的不确定性.
2. 若不同批号试剂的不同组分(A液或酶工作液),或不同试剂的不同组分进行交叉使用,有可能出现显色浅或本底高,花板等情形。
3. 加样时样品量误差,对于阴或很阳的标本影响不大,但对阈值附近的标本影响极大,建议校对加样器。
4. 反应时间的误差,做大量标本时,孔和一孔以及一些特殊标本可能影响较大。
5. 由于滴瓶的精密性肯定不如加样器,不排除不同滴头滴量的误差。另外滴加过程中是否产生气泡、速度是否均匀,是否颤动等影响液量的因素均可导致以上情况。高标准要求时应使用加样器。
6. 阈值附近实际上是个灰区(gray scale),不能截然分为阴性、阳性,国外厂家均要求对这部分可疑标本进行奇数次复检,以次数多者为准,如一次阳两次阴判为阴,但实际上是否为阴不好说,只有判为可疑,临床上可以让患者过一段时间后再测。
7. 肉眼观察稍显色,酶标仪打印为阴性的标本在实际工作中是难以避免的,肉眼目测结果不可靠,应以酶标仪判读为准。
8. 由阴性变为强阳性原因多为操作过程中漏加试剂等有关。
9. 临界值附近标本波动为正常现象,任何试剂均不可避免。可以考虑将标本做奇数次复检。