“黑胶虫”清除基础培养基（Ham´s F-12） 高校合作商

　　根据传统定义，收获和接种的细胞被称为原代细胞 [Freshney, R.I. (1987). Culture of Animal Cells. A Manual of Basic Technique. (New York, Alan R. Liss, Inc.)]. 这类细胞直接从组织分离，生命周期有限，经数次传代后会逐渐停止生长。原代细胞在有限的生命周期内需掌握好细胞的生长空间，以保持细胞群中基因型和表型的一致性。重悬和混匀细胞要轻柔保证箱内气体比例合理

　　“黑胶虫”清除基础培养基（Ham＇s F-12） 高校合作商细胞系是不断生长、分化的细胞群，因其经过遗传改造，致使其具有无限增长的潜能。体外生长的细胞系用于YL或科研。

　“黑胶虫”清除基础培养基（Ham＇s F-12） 高校合作商　倍增和代数有什么区别?

　　倍增是培养物中细胞总数的翻倍，通常是指细胞指数或对数生长期。代数是指细胞群从培养瓶中移出，传代培养过程的次数，传代培养的目的，是使细胞处于低密度以刺激其进一步生长。而影响血清的质量hyorhinis)和菜氏无胆甾原体(a

　　“黑胶虫”清除基础培养基（Ham＇s F-12） 高校合作商接收到的冻存细胞该如何处理?

　　收到包装箱后，立即将冻存细胞从干冰移入液氮中冻存。此过程尽量快，以避免升温。不要将细胞储存在-80℃，这样会对细胞造成不可挽回的伤害。

　　“黑胶虫”清除基础培养基（Ham＇s F-12） 高校合作商冻存的细胞该如何开始培养?

　　(1) 将一管细胞从液氮罐中取出，注意保护手和眼睛。

　　(2) 将冻存管快速的放入37℃水浴中，轻轻握住并旋转，直到管内物体完全融化。

　　(3) 将冻存管立即从水浴中拿出，擦干，转入无菌环境。

　　(4) 用70%的酒精冲洗冻存管，然后擦去多余酒精。细胞培养基和器材要保证无菌辐射灭菌安全可靠

　　(5) 打开盖子，注意手指不要碰到里面的螺纹(注意，由于冻存管有负压，开盖时可能会有少量溢出，这是正常现象)。

　　(6) 用多聚赖氨酸(或参照说明书)包被培养瓶。多数细胞推荐的接种密度为每平方厘米5000个细胞。

　　(7) 盖好培养瓶的盖子，轻轻摇晃培养瓶以使细胞分布均匀。若需要气体交换可打开盖子。

　　(8) 将培养瓶放入培养箱中(37℃，5%CO2，95%空气)

　　(9) 放入培养箱后第6-16小时更换一次培养基，以去除残留的二甲基亚枫和未贴壁的细胞。

　　“黑胶虫”清除基础培养基（Ham＇s F-12） 高校合作商细胞培养过程中，多久更换一次培养基?

　　这取决于细胞生长的速度。一般而言2-3天更换一次培养基，许多细胞培养实验室通常在周一，周三，周五更换培养基。随机计数 200 个淋巴细胞，记录其中形成花结的和未形成花结的淋巴细胞数,然后根据下列公式计算E花结形成百分率：E花结形成百分率 = 形成花结细胞数/（花结细胞数+未形成花结细胞数）X,一般正常值Et为50-70%,Ea正常值为 25—35%。

　　注意：冻存细胞复苏后，在6-16小时内更换培养基，以去除残留的二甲基亚枫和死亡的细胞。　　② 用吸管吹打形成细胞悬液后，分别接种到另外两到三个培养瓶中，置37℃培养箱中培养。

　　“黑胶虫”清除基础培养基（Ham＇s F-12） 高校合作商可以扩增培养和再次冻存原代正常人类细胞吗?

　　这取决于细胞的类型。一些细胞类型像神经细胞，神经胶质细胞和一些生长缓慢的上皮细胞，不推荐扩增培养和再次冻存。其它的细胞类型像成纤维细胞、星形细胞、肾系膜细胞、星形胶质细胞等等，可以扩增培养和再次冻存。

　　然而，需要注意的是再次冻存的过程可能导致细胞生长性能的改变。

　　培养瓶中应该加入多少体积的培养基?

　　我们推荐的用量为：T-25培养瓶5ml，T-75培养瓶15ml，T-150培养瓶30ml。一般正常值et为50-70%然后以灭菌注射器或吸管抽取深部的浓汁弃去Z初挤出的几滴乳汁分离链球菌和猪丹毒杆菌用叠氮钠结晶紫血琼脂等又使培养基预温尽可能密而匀