小鼠骨内膜间充质干细胞完全培养基 语纯新闻

通过平板划线后
　　细胞复苏就是要把原本冷冻保存(冻存)着的细胞恢复到一般的生长状态，今天我们来看看原代细胞的复苏步骤。

　　小鼠骨内膜间充质干细胞完全培养基 语纯新闻一、检查

　　收到细胞株包裹时，请检查细胞株冷冻管是否有解冻情形，若有请立即处理告诉寄方。细胞株请尽速开始培养，或立即冷冻保存(置于–70 °C，隔夜后，移到liq N2)。

　　小鼠骨内膜间充质干细胞完全培养基 语纯新闻、冷冻细胞解冻

　　1、依据细胞株说明书指定的基础培养基种类、血清种类和其它指定之成份和比例，制备培养基。

　　大多数之细胞均无法立即适应不同基础培养基或不同的血清种类，若因实验需要，必须有所不同时，务必以缓慢比例渐次改变培养基组成，确定细胞适应后，方进行所需之实验。37℃孵育5到10分钟

　　2、 FBS (fetal bovine serum, 胎牛血清), CS (calfserum, 小牛血清)和HS (horseserum, 马血清)，对细胞而言差异极大，请务必依据细胞株资料指定的血清种类培养细胞。

　　小鼠骨内膜间充质干细胞完全培养基 语纯新闻3、将培养基置于37 °C 水槽中回温，回温后喷以70 % 酒精并擦拭之，移入无菌操作台内。取出冷冻管，立即放入37 °C 水槽中快速解冻，水面高度不可接近或高过冷冻管之盖沿，否则易发生污染。轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化后，以70 % ethanol 擦拭冷冻管外部，移入无菌操作台内。

　　4、依据细胞种类和浓度，于无菌操作台内取10 ml 培养基加至T25 或T75 flask中。取出已解冻之细胞悬浮液，缓缓加入T25 或T75 flask 内之培养基，混合均匀，放入37 °C，5 % CO2 培养箱培养。

　小鼠骨内膜间充质干细胞完全培养基 语纯新闻　5、大多数细胞而言，1 % 以下之冷冻保护剂DMSO，不会对细胞之贴附或活化有不良影响，不需立刻由解冻细胞中去除，待第二天确定细胞生长或贴附良好后再去除即可。您可以在使用前松开瓶口

　　对少数因对DMSO 敏感或会造成细胞分化之细胞，需立即去除DMSO 者，则可将解冻后之细胞悬浮液放入5 - 10 ml 培养基中，离心300 xg (约1000 rpm)，5 分钟，小心移去上清液，加入适量新鲜培养基，将细胞均匀混合后，转移至培养瓶中，再放入37 °C， 5 % CO2 培养箱培养。

　　小鼠骨内膜间充质干细胞完全培养基 语纯新闻三、收到T25 flask 细胞时的处理方式

　　1. 于寄送过程中，为避免起泡造成细胞脱落死亡，T25 flask 均加满培养基。请检查flask 外观，并于显微镜下观察细胞生长状况和有无污染现象，若有任何问题，不要打开盖子，请立即通知细胞实验室。如果在室温下放置超过30分钟

　　2. 将原封之T25 flask 静置于37 °C， 5 % CO2 培养箱中，使细胞回温至37 °C，并让运送过程中少数脱落的细胞可再附着生长。

　　隔天后，于无菌操作箱内取出flask内之培养基，(取出之培养基可以再使用)，留约5-10ml 培养基于flask 内，依一般培养方式再将细胞置入培养箱中，或细胞已长满盘，则将细胞做传代培养。

　　小鼠骨内膜间充质干细胞完全培养基 语纯新闻四，细胞复苏注意事项

　　1、整个复苏过程尽量手脚麻利一些，战线拉得太长可能影响复苏效果;

　　2、由于“化冰”这一步里冻存管与水温差太大，尤其是液氮里来的冻存管，放到水里可能会造成翻江倒海的既视感，所以可以用镊子夹住冻存管往水里摁，这样即使有炸裂的情况也会有水做缓冲;　　二、悬浮细胞的传代

　　3、取冻存管时要谨防冻伤，尤其是夏天，尽管热也Z好穿长袖白大褂，一些不经意的动作可能会把你的小鲜肉“粘”到冰箱门上;为什么要热灭HX清储存在2-8℃时mycoplasma国内主要有三种译名污染主要来源于配制过程

　　小鼠骨内膜间充质干细胞完全培养基 语纯新闻4、离心这一步也可以在冻存管里的冰融化后直接进行，也就是直接把冻存管离心，离心后弃去原来的冻存液，然后直接加完全培养基重悬细胞，接着把细胞转到培养皿/瓶里培养。这种方法也许不能将DMSO清除得很干净，但是基本影响不大。

　　5、 复苏第二天记得去看看细胞，如果状态还不错的话就说明复苏成功。　　② 去除上清，加新的培养液到离心管内，用吸管吹打使之形成细胞悬液。　　2、加入1ml左右消化液(胰蛋白酶或与EDTA混合液)轻轻摇动培养瓶，使瓶底细胞都浸入溶液中。支原体污染难以观察特殊的外观变化可以用细胞滴片检测1.一定要用新鲜血，否则会影响细胞活性，且绵羊红细胞受体会从T细胞表面脱落。不同的病原菌在患?$n锾迥诜植记榭霾煌?$n即使是同一种病原菌立即注入盛有含0作革兰氏染色、镜检过滤后取沉积于滤板上表面的病料作培养