南昌ELISA试剂盒,小鼠肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA Kit目前报价

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参数规格：

ELISA试剂盒产品我司提供免费代测，快速检测一周内出结果。小鼠、人、马、大鼠、猪、牛等ELISA试剂盒产品种类齐全，现货供应，质量可靠，是广大科研学者学习研究的伙伴。

用途：用于测定血清、血浆、组织和相关液体样本中的含量或者活性

特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的，且与其他相关蛋白无交叉反应

存储条件：2-8℃

规格：96T/48T

产品别名：马转化生长因子β2(TGFB2)ELISA定量检测试剂盒，马转化生长因子β2(TGFB2)酶联免疫试剂盒.

96T使用方法:96TELISA检测试剂盒可用作标本90个，标准曲线6个或者用本公司产品作标本94个,标准对照2个。

48T使用方法：48TELISA检测试剂盒可用作标本46个，标准曲线6个或者用本公司产品作标本47个,标准对照1个。

“ELISA试剂盒价格"冷冻之后要如何使用呢？为其保存后可以使用，但不能反复冻融，因为这是竞争试剂盒，这与激素试剂盒测定激素相似，存储在20 000，预涂板是20 000保存，然后觉得奇怪，为什么这样的操作指南的要求，但正常的测试结果。当然，如果结果是正常的，如病毒检测试剂盒，尤其是正多面体病毒（也就是常说的球状病毒），应放在冰箱冷藏4 000。所以我们建议解冻后运行的时间盒。

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工作原理：

用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗该指标抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗该指标抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成的黄色。颜色的深浅和样品中的该指标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样品浓度。

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试剂盒组成及试剂配制:

1.酶联板(Assay plate )：一块(96孔)。

2.标准品(Standard)：2瓶(冻干品)。

3.样品稀释液(Sample Diluent)：1×20ml/瓶。

4.生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent)：1×10ml/瓶。

5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent)：1×10ml/瓶。

6.生物素标记抗体(Biotin-antibody)：1×120μl/瓶(1：100)

7.辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin)：1×120μl/瓶(1：100)

8.底物溶液(TMB Substrate)：1×10ml/瓶。

9.浓洗涤液(Wash Buffer)：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

10.终止液(Stop Solution)：1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

需要而未提供的试剂和器材：

1.标准规格酶标仪

2.高速离心机

3.电热恒温培养箱

4.干净的试管和Eppendof管

5.系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，Z好用多通道移液器

6.蒸馏水，容量瓶等

感受态细胞制备过程中应注意的问题:

1.细菌的生长状态：实验中应密切注视细菌的生长状态和密度，尽量使用对数生长期的细胞（一般通过检测OD600来控制。DH5?菌株OD600为0.5时细胞密度是5×107/ml）；

2.所有操作均应在无菌条件和冰上进行；

3.经CaCl2处理的细胞，在低温条件下，一定的时间内转化率随时间的推移而增加，24小时达到，之后转化率再下降（这是由于总的活菌数随时间延长而减少造成的）；

4.化合物及无机离子的影响：在Ca2+的基础上联合其他二价金属离子（如Mn2+或Co2+）、DMSO或还原剂等物质处理细菌，可使转化效率大大提高（100-1000倍）；

5.所使用的器皿必须干净。迹量的去污剂或其它化学物质的存在可能大大降低细菌的转化效率；

6.质粒的大小及构型的影响：用于转化的应主要是超螺旋的DNA；

7.一定范围内，转化效率与外源DNA的浓度呈正比；

操作流程：

实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。

为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl(取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制)，37℃,60分钟。

3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。

4.每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液(同生物素标记抗体工作液)100μl，37℃，60分钟。

5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。

6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色(30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止)。

7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后15分钟以内进行检测。 

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注意事项：

1. 用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。

2. 每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是加底物溶液及2N H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。

3. 为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。

4. 未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。标准品、生物素标记抗体工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素标记抗体工作液或、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。

5. 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。

常见问题：

1、不同厂家生产的试剂盒因生产工艺和操作方法略有不同，务必按照所用试剂盒严格操作，否则容易产生检测结果的不确定性.

2、若不同批号试剂的不同组分（A液或酶工作液），或不同试剂的不同组分进行交叉使用，有可能出现显色浅或本底高，花板等情形。

3、加样时样品量误差，对于阴或很阳的标本影响不大，但对阈值附近的标本影响极大，建议校对加样器。

4、反应时间的误差，做大量标本时，孔和一孔以及一些特殊标本可能影响较大。

5、由于滴瓶的精密性肯定不如加样器，不排除不同滴头滴量的误差。另外滴加过程中是否产生气泡、速度是否均匀，是否颤动等影响液量的因素均可导致以上情况。高标准要求时应使用加样器。

6、阈值附近实际上是个灰区（grayscale）,不能截然分为阴性、阳性，国外厂家均要求对这部分可疑标本进行奇数次复检，以次数多者为准，如一次阳两次阴判为阴，但实际上是否为阴不好说，只有判为可疑，临床上可以让患者过一段时间后再测。

7、肉眼观察稍显色，酶标仪打印为阴性的标本在实际工作中是难以避免的，肉眼目测结果不可靠，应以酶标仪判读为准。

8、由阴性变为强阳性原因多为操作过程中漏加试剂等有关。