磷酸化表皮生长因子受体抗体phospho-EGFR(Tyr1068)免疫组化试剂盒

产品名称：磷酸化表皮生长因子受体抗体phospho-EGFR(Tyr1068)免疫组化试剂盒

规格价格：以IHC工作液每个样品用量为100ul来计算，按照稀释比例1:400来计算，本试剂盒中一抗规格100ul可以检测400个样品以上。

保存条件：不使用时取试剂盒中一抗保存-20℃，其他均保存 2-8 ℃

试剂盒特点：利用LAB-SA第二代技术生产的免疫组化检测试剂，特点是高灵敏度，特异性强、定性定位准确、背景清晰等、低倍景染色，直接滴加，操作方便，孵育时间短，适用于冷冻切片、石蜡切片及固定的细胞涂片。可用于检测细胞、组织内的特异性抗原。

温馨提示：本检测试剂盒适用于人、大小鼠，兔等绝大多数组织，但对于内源性生物素含量比较丰富的组织（如肾脏、肝脏等），应选用非生物素检测系统，或用avdin 封闭。
产品特点

磷酸化表皮生长因子受体抗体phospho-EGFR(Tyr1068)免疫组化试剂盒含试剂：

1、一抗（应用：IHC-P=1:400-800 IHC-F=1:400-800 ）

2、无色试剂：内源性过氧化物酶阻断剂

3、试剂A：封闭用正常山羊血清工作液

4、试剂B：生物素标记二抗工作液：生物素标记羊抗兔IgG

5、试剂C：辣根酶标记链酶卵白素工作液

6、显色液D液 (棕色) 1ml

7、显色液E液（白色）20ml
产品相册

用户自备试剂（用户自行购买，亦可咨询我公司客服购买）：

一、0.1M PBS (pH7.2-7.4)缓冲液：

PBS（phosphate buffered solution）即磷酸盐缓冲液，能够提供相对稳定的离子环境和pH缓冲能力，是生物学中经常使用的缓冲盐溶液，用于分子克隆及细胞培养等，pH为7.2-7.4，与人体血液等渗，主要成分为磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠以。

二、柠檬酸钠抗原修复液：

可以用于石蜡切片、冰冻切片等样品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后的抗原修复。可以有效去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联，充分暴露石蜡切片等样品中的抗原表位，从而大大改善免疫染色效果。

抗原修FF法：

方法1：沸水浴修复，将盛有修复液和玻片的烧杯置于沸水浴环境，保持外部沸腾状态15min，自然冷却至室温。

方法2：微波修复，将盛有修复液和玻片的烧杯置于微波炉中，高火5min，停火3min，中火5min，自然冷却至室温。

方法3：高压修复，将盛有修复液和玻片的烧杯置于高压锅，上汽后修复2-5min，然后将高压锅置入凉水中，减压至正常后取出玻片

抗原修复注意事项：

1）脱蜡水化的切片，应避免因切片干燥，而至非特异性染色。

2）热修复操作时务必谨慎，当心烫伤。

3）热修复时间过长易导致脱片，请注意控制时间。

三、DAB（二氨基联苯胺）染色液：

过氧化物酶将使底物发生反应，于反应部位产生棕色沉淀物。标本显色时间一般为室温 5~20分钟，请在显微镜下观察显色况，显色充分后应将标本及时脱水封固。

磷酸化表皮生长因子受体抗体phospho-EGFR(Tyr1068)免疫组化试剂盒实验前准备：

安装步骤与维护一）一抗稀释的准备：

方法1. 实验前，将冻干粉抗体用无菌蒸馏水稀释（或PBS稀释），将稀释后的抗体分装5-10支（20ulx5支或10ulx10支），放入-20℃保存，用一支拿一支，避免反复冻溶。

方法2. 实验前,也可将冻干粉抗体用无菌蒸馏水稀释50ul（或PBS稀释50ul）成原液:再加50%甘油, 放入-20℃保存，用多少吸多少。

方法3. 预试验可做几个梯度1：100、200、400背景高还可做上去，选一个适合的稀释比例，再正式做。工作液的稀释-使用抗体稀释液。

二）DAB显色液的制备实验准备：在1毫升试剂E（DAB 底物液）中，加入1滴（约50微升）试剂D（DAB浓缩液），混合均匀，即配成DAB工作液。此溶液必须现用现配，配好后避光保存，6小时内使用，剩余的液体应弃去。标本显色时间一般为室温 5~20分钟，请在显微镜下观察显色的情况，显色充分后应将标本及时脱水封固。

磷酸化表皮生长因子受体抗体phospho-EGFR(Tyr1068)免疫组化试剂盒实验步骤（建议方案）：

1、石蜡切片，常规脱蜡至水

2、蒸馏水冲洗，pbs 浸泡5 分钟（如需采用抗原修复，在此步骤后进行）。

3、3%双氧水去离子水（无色液体）孵育15-20 分钟，以消除内源性过氧物酶活性。

4、滴加试剂A（蓝色液体）室温孵育15-20 分钟，倾去，勿洗。

5、滴加适当比例稀释的一抗，37℃孵育2-3 小时或4℃过夜。

6、PBS 冲洗，3 分钟3 次。

7、滴加试剂B（黄色液体），室温或37℃孵育15-20 分钟。

8、PBS 冲洗，3 分钟3 次。

9、滴加试剂C（橙色液体），室温或37℃孵育15-20 分钟。

10、PBS 冲洗，3 分钟3 次。

11、显色剂显色（DAB 或AEC）

12、自来水充分冲洗。

13、如果需要，可进行复染，脱水，透明。

14、选择适当的封片剂封片。

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