小鼠骨肉瘤成骨细胞；K7M2 wt [K7M2-WT]说明书_详细资料

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小鼠骨肉瘤成骨细胞；K7M2 wt [K7M2-WT]说明书对于悬浮细胞传代方法：方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

细胞名称 小鼠骨肉瘤成骨细胞；K7M2 wt [K7M2-WT]说明书
形态特性
生长特性贴壁生长
特征特性抗原表达: CD31 阳性 [PubMed:1315100] 产物: 八因子 [PubMed: 11315100]; 整合唾液酸蛋白 (BSP) [PubMed11315100]; biglyan [PubMed: 11315100]; decorrin [PubMed:1315100]; villin 2 (ezrin) [PubMed: 11325848]. 骨唾液酸蛋白, biglyan, decorrin, 和 osteopontin 的表达显示其骨家族细胞特性。
培养条件 DMEM-H: Dulbecco＇s Modified Eagle＇s Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 优质胎牛血清，10%
传代方法消化3-5分钟。1:2。3天内可长满。
传代情况 P(13+5)
冻存条件完全培养基+8%DMSO
小鼠骨肉瘤成骨细胞；K7M2 wt [K7M2-WT]说明书【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
小鼠骨肉瘤成骨细胞；K7M2 wt [K7M2-WT]说明书【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
小鼠骨肉瘤成骨细胞；K7M2 wt [K7M2-WT]说明书细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。

小鼠骨肉瘤成骨细胞；K7M2 wt [K7M2-WT]说明书实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗（Abbioscience公司），然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗（嘉美生物公司）， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜(Leica公司)下观察图像并拍照。
CHOLINECHLORIDE录化胆碱高纯级白色粉末RTsigma
87061-04-93-薄荷氧基-1,2-丙二醇3-[[5-metxyl-2-(1-metxyletxyl)cyclohexyl]oxy]propane-1,2-diol
游离脂肪酸测试盒1000支/包RT
2，3-二巯基丙磺酸... Sodium 2,3-dimercaptopropanesulfonate ... 207233-91-8 250MG 通用试剂
化矢车菊素; 花青素 Cyanidin Chloride (≥98%,HPLC) 528-58-5 5MG 标准品
肝素抗凝管shēng huà shì jì容量：RT支
(四硼酸钠)
丁二酸
队本硼醋 4-Tolylboronic ccid 270-2-8
寡霉素1公斤
赫斯特荧光燃料33342，英文名或英文缩写：Hoechst 33342，级别：BR，99%，规格：1公斤
GUANIDINExy7noCHLORIDE盐酸胍技术级白色至微黄色颗粒结晶粉末RTsigma
四[3-(3,5-二叔丁基-4-羌本基)炳醋]季务四醇酯 Pqntcqrythritol tqtrckis(3-(3,5-di-tqrt-butyl-4-xy7noxyphqnyl)propionctq) 6683-19-8
月桂酸乙酯/十二酸乙酯/Ethyl laurate CP，98.5% 250毫升国产/进口
铬片/铬/金属铬/Chromium 3.5N， 25克国产/进口
脑—心浸萃液态培养基28360广泛用于霉菌、酵母、细菌的培养，包括营养要求较高的微生物的培养，特别用于饮用天然矿泉水和城...
Vogel-Johnson 琼脂 (CM0641) Oxoid incubation media Vogel-Johnson 琼脂 (CM0641) Oxoid
凸形假单胞杆菌产氨支/瓶
A-250g用于水中粪大肠菌群检测
BloodAgarBase
小鼠骨肉瘤成骨细胞；K7M2 wt [K7M2-WT]说明书AHM鉴别培养基28400250g用于致病性嗜水气单胞菌鉴别(GB/T-2002、SN/T0750)
SOB Broth-capsule 培养基 5capsules incubation media SOB Broth-capsule 培养基 5capsules
吸水链霉菌奥萨霉素亚种支/瓶
SOC培养基250g用于基因工程菌大肠杆菌培养
炭疽杆菌噬菌体 1ml 培养基 5cap炭疽杆菌检测用配套试剂
SOB Agar-capsule
注意事项：
1. 收到 小鼠骨肉瘤成骨细胞；K7M2 wt [K7M2-WT]说明书后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们。
2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

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