人肺腺癌瘤株；Calu-3图片对于悬浮细胞传代方法：方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
注意事项：
1. 收到 人肺腺癌瘤株；Calu-3图片后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们。
2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
细胞名称 人肺腺癌瘤株；Calu-3图片
形态特性 实体瘤
生长特性 体内生长
特征特性 该细胞来源患者已经用环磷酰胺、博来霉素、阿霉素进行过ZL。利用培养的细胞系，进行裸鼠体内移植，形成实体瘤，冻存，可用于建立人肺腺癌的体内移植模型。
培养条件 -
传代方法 制备成细胞悬液接种至免疫缺陷小鼠。
传代情况 P1
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
【培养指南】
人肺腺癌瘤株；Calu-3图片对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【细胞冻存】
人肺腺癌瘤株；Calu-3图片待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞培养的优点：1.人肺腺癌瘤株；Calu-3图片研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
实验报告：
一、人肺腺癌瘤株；Calu-3图片分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗（Abbioscience公司），然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗（嘉美生物公司）， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜(Leica公司)下观察图像并拍照。
3-基酚100毫克保存：-20℃
7440-55-3镓GalliuM
DL-焦谷酸100克
2,3-二基 2,3-Diaminopyridine,95% 452-58-4 1G 通用试剂
硅烷偶联剂KH570/3-(异丁烯酰氧)丙基氧基硅烷/3-(甲基丙烯酰氧)丙基氧基硅烷/基硅烷丙基丙烯酸脂/MEMO BR，98% 1公斤 国产/进口
化铯shēng huà shì jì容量：5克
(链亲合素)
4-羟基0.25毫升
4-肖基本-β-D-半乳糖苷(-20°C) 4-nitnophqnyl-bqtc-D-gclcctopyrcnosidq 3120/4/1
N-辛酰基-N-甲基葡糖胺5克2～8℃
甲基百里酚蓝1克
β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型辅酶二钠盐(+4℃)NA
4-本酚，英文名或英文缩写：4-Iodopxenol，级别：AR，99.5%，规格：5克
啉 Morpholine,≥99.0% 110-91-8 100ML 通用试剂
L-环务基甘安醋 L-CYCLOPqNTYL GLYCINq 21-84-8
麦芽汁琼脂250g用于霉菌和酵母菌计数
Preston 选择性添加物 4支/盒 incubation media Preston 选择性添加物 4支/盒
沙门氏菌显色培养基配套平皿 Salmonella Chromogenic Medium Dish 9㎝/块
双歧杆菌BS培养基250用于双歧杆菌分离培养incubationmedia双歧杆菌BS培养基250用于双歧杆菌分离培养
人肺腺癌瘤株；Calu-3图片四环素检定琼脂 250g 用于四环素残留的微生物学检定(SN标准)
LM-gar
波尔顿选择性增菌肉汤 Bolton Selective Enrichment broth 用于弯曲杆菌选择性增菌培养
溴化十六烷基铵琼脂培养基 Cetrimide Agar Medium 250克 绿脓杆菌的分离
溴紫葡萄糖蛋白胨培养基250g/瓶用于鲜乳中抗生素残留检验incubationmedia溴紫葡萄糖蛋白胨培养基250g/瓶用于鲜乳中抗生素残留检验
氧化酶试纸 10片 用于O157：H7菌氧化酶试验
沪公网安备 31011502008050号
