人乙肝核心抗体（HBcAb）elisa检测试剂盒我们的核心专长

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供科研使用，不得用于临床检验。

 

人乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb）定量检测试剂盒  （ELISA）简略版说明

【产品名称】

通用名称：人乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb）定量检测试剂盒（ELISA）

英文名称：Human Hepatitis B virus Surface Antibody（HBsAb） ELISA KIT

【包装规格】

48 人份/盒，96 人份/盒

【检验原理】
乙肝核心抗体，HBcAb，人elisa试剂盒作原理

 本试剂盒采用双抗原夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）。在预包被人乙型肝炎病毒表面抗

原（HBsAg）的微孔酶标板中，加入人乙型肝炎病毒表面抗 体（HBsAb）校准品和待测样本，再加入另一株 HRP 标记的人乙型肝 炎病毒表面抗原（HBsAg），经过温育与充分洗涤，去除未 结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗原-抗体-酶标抗原的夹心复合物。加底物 A 和 B，底物在 HRP 催化下，产生蓝色产物，在终止液（2M 硫酸）作用下，转化为黄色，在酶标 仪上测定吸光度（OD 值），吸光度（OD 值）与待测样品中人乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb）的浓度正相关。拟合校准品曲线，可以计算出样本中人乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb）的浓度。

乙肝核心抗体，HBcAb，人elisa试剂盒校准品浓度依次为：16、8、4、2、1、0 mIU/ml。校准品已经通过测试，结果表明 HIV1、 HIV2 和 HCV 抗体阴性，由于不存在一种试验方法能够完全保证没有这些物质，本品必须按照 具有潜在的感染性进行处理，处理过程应当遵循通用的安全措施。

需要但未提供的材料及耗材

1、酶标仪

2、精密移液器及一次性吸头

3、蒸馏水

4、洗瓶或者自动洗板机

5、37℃水浴锅或恒温箱

6、500ml 量筒

7、无粉一次性乳胶手套

8、质控品（可供选择）

产品特点

样本在 2-8℃条件下，可以储存 72h，或者在- 20℃储存 6 个月。样本收集后，不是一次 检测完，请按一次用量分装冻存，避免反复冻融，使用时在室温下解冻，确保样品均匀充分 解冻。

【检验方法】

试剂准备
主要优点

1、使用前，所有的组分都要至少复温 30min，确保充分复温到室温。

2、浓缩洗涤液：从冰箱取出的浓缩洗涤液，会有结晶产生，这属于正常现象，水浴加热使 结晶完全溶解。浓缩洗涤液与蒸馏水，按 1:20 稀释，即 1 份的浓缩洗涤液，添加 19 份的蒸 馏水。

3、底物：底物液 A 和 B，在使用前，按 1:1 体积充分混合，混合后 15 分钟内使用。

操作程序

1、所有试剂和组分都先恢复到室温，标准品、质控品和样品，建议做复孔。

2、按前面试剂准备中描述的方法，配制好试剂盒各种组分的工作液。

3、从铝箔袋中取出所需板条，剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。

4、设置标准品孔、样本孔和空白孔，标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL，样本孔加 待测样本 50μL，空白孔不加。

5、除空白孔外，标准品孔和样本孔，加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体 100μL。

6、用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。 7、揭开封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 20s，甩去洗涤液，

吸水纸上拍干。

8、如此重复 4 次（共洗板 5 次）。若使用自动洗板机，请按洗板机操作程序进行洗板，添

加浸泡 20s 的程序，可以提高检测的精度。洗板结束，加底物前，要在干净不掉屑的纸上， 充分拍干反应板。

9、将底物 A 和 B 按 1:1 体积充分混合，所有孔中加入底物混合液 100μL。用封板膜盖住 反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育 15min。

10、所有孔加入终止液 50μL，在酶标仪上读取各孔吸光度（OD 值）。

乙肝核心抗体，HBcAb，人elisa试剂盒代测服务

【检验结果的解释】

检测完成后，以标准品浓度做为纵坐标，对应的吸光度（OD 值）作为横坐标，利用计算 机软件，采用四参数 Logistic 曲线拟合（4-pl），创建标准曲线方程，通过样本的吸光度（OD值），利用方程计算样品的浓度值。如果样品被稀释，通过上述方法测的的浓度值，要乘以稀释倍数，才是样品的浓度。

【储存条件及有效期】

1、2-8℃保存，切勿冷冻，有效期 6 个月。

2、开封使用后，包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中，密闭自封袋，并将全部试剂放回

2-8℃冰箱。

3、开封后，按照建议的条件保存，校准品、包被微孔板和 HRP 标记抗体，有效期为 14 天， 其他成分在标签标明的有效期内是稳定的。

【适用仪器】

半自动的酶标仪，如 Thermo MK3，或者国产酶标仪。

【样本要求】

样本类型和采集 以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中，不得使用叠氮钠做为防腐剂。

1、细胞培养上清：4000rpm 条件下离心 20min，去除细胞颗粒和聚合物，上清液保存在-20℃以下，避免反复冻融。

2、血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，4000rpm 条件 下离心 20min，小心地分离出血清，保存在- 20℃以下，避免反复冻融。

3、血浆：肝素，EDTA，或柠檬酸钠作为抗凝剂。在 4000rpm 条件下，离心 20 分钟取上 清，血浆保存在-20℃以下，避免反复冻融。

乙肝核心抗体，HBcAb，人elisa试剂盒样本保存和稳定性
 

【产品性能指标】

1、物理性能

试剂盒的各液体组分应澄清透明、无沉淀或者絮状物。微孔板铝箔袋应真空包装，无破 损漏气。

2、剂量反应曲线线性

校准品剂量反应曲线相关系数 r 值，大于等0.9900。

3、精密度

批内精密度：三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在同一个板块内精度评估。 批内变异系数 CV%小于 10%。

批间精密度：三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在不同板块内精度评估。批 间变异系数 CV%小于 15%。

4、灵敏度检出剂量小于 0.13 mIU/ml。

5、回收率三组已知的高、中、低浓度样品，进行五次回收率评估，回收率在 85%-115%之间。

6、特异性 本试剂盒识别天然和重组人乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb），与结构类似物无交叉。

7、稳定性2℃-8℃保存，有效期 6 个月。

乙肝核心抗体，HBcAb，人elisa试剂盒常见问题

【注意事项】

生物安全

1、检测必须符合实验室管理规范的规定，严格防止交叉污染，所有样品、洗弃液和各种废 弃物都应按照传染物进行处置。

2、试剂盒的液体组分中，含有 proclin-300 防腐剂，可能引起皮肤过敏反应，避免吸入烟 雾与皮肤接触。

3、底物液对皮肤、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入烟雾。戴上防护手套，实验完成 后彻底洗手。

技术提示

1、混合蛋白溶液时，避免起泡。

2、加校准品与样本时，每个校准品浓度和样本都要更换移液枪头，公共组分应该悬臂加样， 避免交叉污染。

3、合适的温育时间，和充分的洗涤步骤，是保证实验结果准确性的必要条件。

产品用途
了解用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙肝二对半核心抗体(抗-HBc)的假阴性。方法:留取用ELISA检测HBsAg阳性、HBeAg阳性、抗-HBc阴性血清标本201份,分别用美国雅培AXSYM免疫发光仪微粒子酶免疫技术(MEIA)定量检测抗HBc、ELISA进行原倍和生理盐水15倍稀释测定。结果:MEIA法定量检测抗-HBc阳性166份,阳性检出率为82. 6%;阴性(S/Co1 0)35份,与ELISA一步法相比阴性符合率为19 .9%,生理盐水15倍稀释阳性33份,阳性检出率为19 4%,原倍血清 阳性。结论:MEIA法定量检测的阳性率远远高于ELISA法检测, 15倍稀释测定结果阳性率比30倍稀释有所提高,原倍血清仅作为流行病学调查结果。

酶联免疫吸附法(ELISA)检测乙肝核心抗体(Anti-HBc)设定灰区在样本判读中的意义。方法应用ELISA法检测Anti-HBc,对108例检测结果(S/CO)处于边缘值(0.50~1.50)的样本应用罗氏电化学发光法和雅培酶免疫化学发光法进行复检。同时对3种方法检测结果进行相关性分析。结果罗氏与雅培的检测结果显著相关(r=0.621,P0.01)。108份样本,应用其他两种方法复检,可以得到70例确证结果。通过乙肝PCR或既往乙肝标志物检测结果分析,复检结果全部阳性和不确定样本皆存在既往感染,全部阴性者未有既往感染。结论 ELISA法检测Anti-HBc在判读上缺乏足够的敏感性和特异性。实验S/CO值在0.56~1.36范围内判读同样存在假阳性和假阴性。实验室应根据自身条件设定检测灰区,并以"灰区"出具报告并建议定期复检,以免造成误诊或漏检。