1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-1335微量可调八道移液器P10Phenolphthalein test paper
shgoy-1336微量可调八道移液器P50Phenolphthalexone
shgoy-1337微量可调八道移液器P300Thymol
shgoy-1338移液器P2.5Rhodamine 123
shgoy-1339单道移液器P10Rhodamine B
shgoy-1340移液器P20TMB
shgoy-1341移液器P503,3,5,5-Tetramethyl benzidine solution liquid-1 component
shgoy-1342移液器P1003,3,5,5-Tetramethyl benzidine solution liquid membrane substrate
shgoy-1343移液器P200TMB•2HC1
shgoy-1344移液器P1000TMB-US(ultra sensitive) solution
shgoy-1345移液器P5000TMB-Stop solution
shgoy-1346玻璃珠FDA
shgoy-13476孔细胞培养板Fluorescein dichloride
shgoy-134812孔细胞培养板3',6'-Dichlorofluoran
shgoy-134924孔细胞培养板DAB
shgoy-135048孔细胞培养板DAB
shgoy-135196孔细胞培养板DAB substrate tablets
shgoy-135225cm2三角斜口细胞培养瓶EB
shgoy-135325cm2正方斜口细胞培养瓶PI
shgoy-135475cm2三角斜口细胞培养瓶"DAOS
"
shgoy-135575cm2正方斜口细胞培养瓶4-NPP
IL5RA/CD125白介素-5受体α链抗体IL-5Rα
IL-10RB/CRFB4白细胞介素-10受体β抗体
IL-12RB1/CD212白细胞介素-12受体β1抗体
IL12RB2白细胞介素-12受体β2抗体
IL-15RA白介素15受体α抗体
IL-17R/IL-17RA/CD217白介素17受体抗体
IL-17RB白介素-17B受体抗体
IL-18R Beta/IL1R7/CD218b白细胞介素-18受体β链抗体
IL-21白介素21抗体
IL-21R白介素21受体抗体
IL-22白介素-22抗体
IL-29/IFNL1白细胞介素29抗体
IL-22BP/IL22RA2白介素22受体结合蛋白抗体
IRAK4白介素-1受体相关激酶4抗体
核酸稀释液,测 OD 专用100mL包装IRF4干扰素调节因子4抗体
IGF-I Receptor beta胰岛素样生长因子1受体β/IGF-IRβ 抗体
ING4ING4抗体
rat IgA大鼠血清型IgA抗体
MDA7/IL-24/IL-17F白介素-17F抗体
IGFL1胰岛素生长因子样家族成员1抗体
IL-17C白介素-17C抗体
ADM2中介素抗体
IkB betaNF-kappa-BYZ子beta抗体
IRF6干扰素调节因子6抗体
IQGAP2
IGFL4胰岛素生长因子样家族成员4抗体
IL-31白细胞介素31抗体
IFI78干扰素诱导蛋白P78抗体
Inhibin AlphaYZ素α/Inhibin α抗体
核酸稀释液,测 OD 专用100mL包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCRYZ物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。