细胞名称 突变型Cas9稳定表达的人肝腹水腺癌细胞;SK-HEP-1-mCas9-737图片
形态特性 上皮样
生长特性 贴壁生长
特征特性 该细胞是采用慢病毒感染的方式使SK-HEP-1细胞稳定表达突变型的Cas9蛋白,该蛋白可以降低基因编辑时的脱靶效率,经2.0ug/ml Puromycin筛选得到的单克隆,经Western Blotting验证该克隆可以表达Cas9蛋白,可直接用Crispr技术编辑基因组DNA。
培养条件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS;2.0ug/ml Puromycin
传代方法 1:2~1:6传代;2~3天换液1次。
传代情况
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 培养法(-)
STR Amelogenin:X,X;CSF1PO:11,12;D12S391:18,18;D13S317:8,12;D16S539:12,12;D18S51:13,15;D19S433:12,15.2;D21S11:29,31,32;D2S1338:20,23;D3S1358:16,16;D5S818:10,13;D6S1043:11,11;D7S820:8,11;D8S1179:13,14;FGA:17,17;Penta E:13,21;TH01:7,9;TPOX:9,9;vWA:14,17;
同工酶
染色体
使用权限 A类
突变型Cas9稳定表达的人肝腹水腺癌细胞;SK-HEP-1-mCas9-737图片操作步骤:
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中,将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片,待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室温孵育爬片20min,使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶,室温孵育15min(一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢),PBS冲洗3次,每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min,PBS冲洗3次,每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育:按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗,滴加在爬片上,于4°C湿盒中孵育一夜,PBS冲洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:选与一抗对应的二抗,按比例稀释后滴加在爬片上,37°C湿盒中孵育30min,PBS冲洗3次,每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干,爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液,显微镜下观察,当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染:用Harris苏木素复染30s~1min,水洗后用1%的盐酸酒精分化,再用蒸馏水(或PBS)水洗返蓝。
10. 封片:将中性树胶滴在爬片一侧,再用盖玻片盖上,先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧,以免产生气泡,封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
突变型Cas9稳定表达的人肝腹水腺癌细胞;SK-HEP-1-mCas9-737图片复苏操作要点:
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内完全解冻,使细胞能尽快通过Z易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
突变型Cas9稳定表达的人肝腹水腺癌细胞;SK-HEP-1-mCas9-737图片培养温馨提示:
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英文名称:DalbergioidinCAS:30368-42-42',4',5,7-四羟基异黄烷酮用途:本品用于含量测定,药理科研。包装内附产品质量检测及鉴定报告,因为品质是企业的决战场,是基业长青的保证,我公司提供的一切产品仅供科研,实验室用,不得用于注射,食用或者其他用途。公式:C15H12O6纯度:≥95%植物来源:
英文名称:Dammar-20(21)-en-3,24,25-triolCAS:55050-69-6达玛树脂-20(21)-烯-3,24,25-三醇用途:本品用于含量测定,药理科研。包装内附产品质量检测及鉴定报告,因为品质是企业的决战场,是基业长青的保证,我公司提供的一切产品仅供科研,实验室用,不得用于注射,食用或者其他用途。公式:C30H52O3纯度:≥95%植物来源:
英文名称:Dammaradienyl acetateCAS:52914-31-5达玛二烯醇乙酸酯用途:本品用于含量测定,药理科研。包装内附产品质量检测及鉴定报告,因为品质是企业的决战场,是基业长青的保证,我公司提供的一切产品仅供科研,实验室用,不得用于注射,食用或者其他用途。公式:C32H52O2纯度:≥98.5%植物来源:
英文名称:Dammarenediol IICAS:14351-29-2达玛烯二醇II用途:本品用于含量测定,药理科研。包装内附产品质量检测及鉴定报告,因为品质是企业的决战场,是基业长青的保证,我公司提供的一切产品仅供科研,实验室用,不得用于注射,食用或者其他用途。公式:C30H52O2纯度:≥98.5%植物来源:
M0042β-半乳糖苷酶/乳糖酶/β-D-半乳糖苷酶/乳糖分解酵素/乳酸酶/GAL/β-Galactosidase from Escherichia coli,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品Pai,9031/11/22~8℃BR,,250-600u/mg1KU
,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品Pai,5KU
中文名称: β-半乳糖苷酶
其他中文名称: 乳糖酶;β-D-半乳糖苷酶;乳酸酶
英文名称: β-Galactosidase from Escherichia coli
其他英文名称: GAL;β-D-Galactoside galactohydrolase; Lactase
产品规格: BR,,250-600u/mg
包装: 5KU/1KU
CAS号:9031-11-2
级别:BR
分子量:100~850KDa
活力:250~600units/mg protein
活力定义:One unit causes the formation of one micromole of ONP per min at pH 7.3 at 37℃
纯度:≥80%
突变型Cas9稳定表达的人肝腹水腺癌细胞;SK-HEP-1-mCas9-737图片性状:淡黄色粉末,无臭,微甜。一种能把乳糖水解成葡萄糖和半乳糖的酶。一般是指能将β-半乳糖苷水解为半乳糖和糖苷的酶。在水中呈混沌液(大部分溶解),不溶于乙醇、丙酮。PH范围5.5~9.5(25℃,20hr),Z适pH7.0,Z适作用温度50℃。测活时,粉末用100mM pH7.3磷酸钾缓冲液溶解成透明液体。
用途:生化研究。β-半乳糖苷酶能够水解通过β-1→4糖苷键连接在单糖、寡糖或糖肽上的半乳糖残基。它主要用于酶联免疫检测中,偶联在抗体上作为标记物。此外,β-半乳糖苷酶还可用于糖类结构分析、乳糖检测和钠离子检测
保存:2~8℃