高分辨率琼脂糖(PCR级) 核酸电泳和回收

名称：高分辨率琼脂糖(PCR级) 核酸电泳和回收
英文名：High Sieving Agarose
规格：5g
品Pai：百奥莱博
编号：SY0256
琼脂糖（Agarose）是纯化的线性半乳聚糖亲水胶体，提取自琼脂或者含琼脂的海藻，结构上是一种线性聚合物，由β-D-吡喃半乳糖（1-4）连接3,6-脱水α-L-吡喃半乳糖基构成。作为一种凝胶试剂，常用于通过凝胶电泳或者印迹法（如Northern或Southern）来进行日常核酸分析，也适用于蛋白应用，如辐射状免疫扩散（RID）实验。

本品为PCR级高分辨率琼脂糖，对PCR产物、小片段DNA具有较高的分辨率，适宜分离20bp-800bp的DNA*(代＇片＇)段，其分离效果可与聚丙烯酰胺相媲美。此外，还具有如下特点：
1）易溶解，胶液更清澈，可以配制高达5%的凝胶；
2）很低的背景；
3）品质稳定等。

琼脂糖的基本参数，包括：

1） 硫酸盐含量（sulfate content）——纯度指标，因为硫酸根是存在琼脂糖内的主要离子基团；
2） 凝胶强度（gel strength）——施加于凝胶使之断裂的外力；
3） 胶凝点（Gel point）——水溶性琼脂糖溶液冷却后形成凝胶时的温度。液体向凝胶转化的过程中，琼脂糖溶液具有滞后性，因此，胶凝点不等同于胶熔点。
4） 电渗（EEO）——液体穿透凝胶的一种电动运动。琼脂糖凝胶内的阴离子基团吸附在基质上不会发生迁移，但是解离的阳离子就会朝负极迁移，从而产生电渗。由于生物聚合物的电泳迁移通常是朝负极运动，则EEO产生的内部对流会干扰分离效率。

产品性质

CAS：	39346-81-1
外观（Appearance）	白色粉末
凝胶强度（Gel Strength）	≥750g/cm2（1.5% gel）
凝胶温度（Gel Point）	≤33℃（1.5% gel）
融胶温度（Melting Point）	≤70℃（1.5% gel）
电渗值（EEO, -mr）	≤0.10
外观（Appearance）	无色清澈胶液
硫酸盐（Sulfate, %）	≤0.10%
水分：	≤10%
灰分（Ash Content）	≤0.5%
DNA酶（DNase）	Not detected
RNA酶（RNase）	Not detected
蛋白酶（Protease）	Not detected
核酸内切酶（Endonuclease）	Not detected

使用方法

1）配制适量电泳及制胶用的缓冲液（根据电泳需要，配制合适浓度的电泳及制胶缓冲液），倒入合适三角瓶中。【注意】：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须是相同的。
2）根据制胶量及凝胶浓度，加入准确称量的琼脂糖粉（总液体量不宜超过三角锥瓶的50%容量）。
3）在微波炉中加热溶解琼脂糖，设置中火加热至沸腾，保持胶液沸腾约 30s，戴上防热手套，移开三角锥瓶，小心摇动三角锥瓶，重悬未溶解颗粒，再次用高火加热1分钟（或加热直至琼脂糖完全溶解）。请戴上防热手套，小心摇动三角锥瓶，使琼脂糖胶液充分均匀。
【注意】：必须保证琼脂糖充分完全溶解，此时琼脂糖胶液清澈，否则，会造成电泳图像模糊不清。加热时如胶液剧烈沸腾发泡，停止加热。微波炉中加热时间不宜过长。
4）使溶液冷却至60℃左右，如需要可在此时加入溴化乙锭(EB)溶液使其终浓度为0.5µg/ml，并充分混匀。
【注意】：溴化乙锭是一种致癌物质。使用含有溴化乙锭的溶液时，请戴用手套。建议使用我司提供的EB无毒替代品（YeaRed 核酸染料，Cat# 10202），使用时仅需用制胶缓冲液稀释至1×工作液即可。
5）将琼脂糖溶液倒入制胶模具中，在适当位置处插上梳子。凝胶厚度一般在3-5mm之间。
6）在室温下使胶凝固（大约30min-1h），然后放置于电泳槽中进行电泳。
【注意】：凝胶不立即使用时，请用保鲜膜将凝胶包好后在4℃下保存，一般可保存 2～5天。

琼脂糖浓度与DNA分离范围

线性DNA*(代＇片＇)段大小（bp）	20-250	50-500	100-1200	500-2000
琼脂糖浓度（%）	5.0	4.0	3.0	2.0

更多有关高分辨率琼脂糖(PCR级) 核酸电泳和回收的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销售以下产品：

·柠檬酸钠-EDTA抗原修复液(40×)
编号：SY0774
英文名称：Antigen Retrieval Buffer (40×Citrate-EDTA, pH 6.2)
规格：125ml
免疫染色实验，细胞或组织往往需要经多聚甲醛、甲醛或其他醛类固定来维持本身的形态结构，然而此步操作通常会封闭抗原决定簇，使得相当多的抗原不能与抗体很好的进行反应，从而引起染色信号衰减，甚至出现假阴性现象。引起抗原决定簇被掩盖的原因在于：1）醛类固定剂导致组织上的许多氨基酸残基在分子内或分子间形成醛键，从而封闭抗原表位；2）醛类固定剂在固定过程中与蛋白质发生交联（cross-link），形成醛交联蛋白，导致抗原表位被封闭。因此，需要对固定组织进行抗原修复（antigen retrieval，AR）来逆转被掩盖的抗原表位，使其重新暴露出来，恢复抗原表位-抗体的结合能力，从而改善染色效果。

抗原修复的方法非常多，主要有热诱导的抗原修复（Heat Induced Epitope Retrieval，HIER）和酶诱导的抗原修复（Proteolytic Induced Epitope Retrieval），修FF法的选择需要考虑到抗原表达程度、抗体要求、组织类型以及组织固定方法等因素。作为免疫染色至关重要的一步，抗原修FF法的选择、温度、pH值、修复时间、修复介质都会影响到实验结果。实验者需根据自身的实验体系以及实验条件来选择恰当的修复溶液，从而达到的修复效果。

本品为柠檬酸钠-EDTA抗原修复缓冲液，pH 6.2，采用了常用的柠檬酸钠缓冲液和EDTA，结合了两者修复抗原的优点，并经过适当优化，可以更加有效去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联，充分暴露石蜡切片等样品中的抗原表位，从而大大改善免疫染色效果。本品可以用于石蜡切片、冰冻切片等样品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后的抗原修复。

本品为40×浓缩的柠檬酸钠-EDTA抗原修复液，使用前需用ddH2O稀释成1×工作液。

注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）抗原修复通常用于醛类固定的石蜡切片，而冰冻切片由于组织比较脆弱，易在修复过程中被破坏掉，因此比较少进行抗原修复。然而醛类固定的冰冻切片同样会发生蛋白交联而封闭抗原表位，导致染色效果不佳。很多文献资料表明采用适当的方法进行冰冻切片抗原修复，也能显著改善染色效果。特别是当染色效果欠佳的前提下，可考虑进行冰冻切片的抗原修复。
3）本产品经冻存后需经适当加热后才能完全溶解。同时由于本产品含有少量的特殊去垢剂，加热后会产生非常细密的气泡而呈现非常均匀的类似浑浊状，属于正常现象，并非不溶解或产生了沉淀。室温放置较长时间后，例如1-2天，溶液会完全澄清。对于溶解后呈现非常均匀的类似浑浊状的本产品，此时即可取适量稀释后使用。抗原修复过程中加热时也会产生非常细密的气泡而呈现均匀的浑浊状，也属于正常现象，请放心使用。
4）修复过程中一定要使用足量的修复液（1×）来完全浸没组织切片。

储存条件：4℃，有效期一年。


高分辨率琼脂糖(PCR级) 核酸电泳和回收