耐热逆转录酶II北京厂家现货

名称：耐热逆转录酶II北京厂家现货
编号：SY0294
英文名：Reverse Transcriptase II
产地：国产|进口
Reverse Transcriptase（第二代耐热逆转录酶）是Reverse Transcriptase（代耐热逆转录）的升级产品，是在M-MLV (RNase H-) Reverse Transcriptase基础上通过体外分子进化技术获得的全新耐热逆转录酶。与上一代相比，进一步大幅提高了热稳定性，50℃下半衰期超过240min，并长时间耐受55℃高温且保持稳定，非常适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。此外，增加了多个突变位点，进一步增强了模板亲和力和行进性，大幅提升全长cDNA的合成能力，可获得长达20 kb的cDNA。另外，对于常见的逆转录YZ物具有更高的耐受度，非常适合于植物组织RNA的逆转录反应。

活性定义：以Poly(rA) Oligo(dT)为模板/引物，在37℃，10min内，掺入1 nmol的dTTP为酸不性溶物质所需要酶量定义为1个活性单位（U）。

质量控制
核酸外切酶残留检测：200 U本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在37 ºC下孵育1h，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：200 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在37 ºC下孵育1h，DNA的电泳谱带不发生变化。
RNase残留检测：200 U本品和1 μg小鼠肝脏总RNA在37 ºC下孵育1h，RNA电泳谱带不发生变化。
功能检测1：逆转录体系中加入200 U本品，以100 pg Hela cell total RNA为模板，Oligo(dT)23为引物，50 ºC反应30min。取10% cDNA产物进行PCR扩增β-actin基因。琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的550 bp条带。
功能检测2：逆转录体系中加入200 U本品，以500 ng Hela cell total RNA为模板，Oligo(dT)23为引物，55 ºC反应45min。取10% cDNA产物进行PCR扩增Polε基因。琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的4.8 kb (GC-rich)条带。
功能检测3：逆转录体系中加入200 U本品，以1 pg-1 μg Hela cell total RNA为模板，Oligo(dT)23VN和Random Hexamers为引物，测试qRT-PCR 性能。以6个数量级的模板量的对数值对Ct值做标准曲线，R2>0.990，斜率在-3.20到-3.60之间。

准备工作
1. 防止RNase污染：请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用的离心管、枪头等耗材均需保证RNase free。
2. 引物选择：
2.1 后续实验为PCR
a, 如果模板为真核生物来源，一般情况下Oligo dT18，与真核生物mRNA的3’Poly A尾配对，可获得产量的全长cDNA。
b, 基因特异性引物 (GSP)的特异性。但有些情况下，用于PCR反应的GSP无法有效引导链cDNA合成。这时，可改用Oligo dT18或Random hexamers重新进行逆转录。
c, Random hexamers特异性，所有RNA，包括mRNA, rRNA, tRNA均可以作为Random hexamers的模板。当目标区域具有复杂二级结构或GC含量较高，或者模板为原核生物来源，使用Oligo dT18或基因特异性引物 (GSP)无法有效引导cDNA合成时，可使用Random hexamers为引物。
2.2 后续实验为qPCR
a, 将Oligo dT18与Random hexamers混合使用，可使mRNA的各个区域均能以相同效率引发cDNA合成，有助于提高定量结果的重复性。

耐热逆转录酶II北京厂家现货正在火爆，除此之外，为您推荐下别产品：

·DPH(二肉桂酰)
编号：SY0580
英文名称：1,6-Diphenyl-1,3,5-hexatriene(DPH)
规格：50mg
DPH一种膜脂质探针，可作为尼罗红的一种替代试剂用于脂滴的荧光检测，进而研究膜结构和膜的流动性。

中文别名：二肉桂酰
英文别名：DPH; Dicinnamyl; 1,6-diphenylhexatriene
CAS：1720-32-7
分子式：C18H16
分子量：232.32
外观：黄色至棕褐色粉末，结晶或鳞片状
纯度：≥97.5%
溶解性：溶于氯*(代＇仿＇)（10mg/ml），甲醇
储存条件：室温
结构式


·小鼠免疫组化(IHC)检测试剂盒
编号：SY0769
英文名称：Immunohischemistry Kit for Mouse Primary Antibody
规格：150T
本试剂盒可用于检测以小鼠单克隆或多克隆抗体为一抗的免疫组化实验，检测原理基于高特异性高亲和力的链霉亲和素-生物素结合：已固定或培养细胞的抗原与一抗形成抗原抗体复合物，生物素化二抗特异性结合上述复合物，经辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素特异性识别生物素（即抗原所在位置），经辣根过氧化物酶底物显色即可检测相应抗原。

本品可适用于多种类型样本，如石蜡包埋切片、冰冻切片、培养细胞涂片及血液标本等。

产品组份：

封闭液————————————7.5ml
生物素标记抗小鼠二抗————7.5ml
HRP 标记链霉亲和素————7.5ml
20×DAB底物缓冲液————400µl
20×H2O2浓缩液————400µl
20×DAB浓缩液————400µl

使用方法

1 样品准备
染色前用PBS浸泡组织或细胞涂片10min。石蜡切片于室温下用二甲苯常规脱蜡、入水、抗原修复。
【注】：从此步骤起，严禁标本或组织切片干燥。

2 染色（以石蜡切片为例）
1）将处理好的石蜡切片放入3% H2O2-甲醇溶液中浸泡10min，以消除内源性过氧化氢酶的作用。
2）清洗：PBS清洗3次，2 min/次。
3）封闭：加一滴封闭液于组织切片上（需完全覆盖待检组织）孵育10min。
4）倒掉或吸干液体（不要冲洗）。
5）一抗：每张切片加2滴（100μl）或适量一抗（需完全覆盖待检组织），湿盒内孵育30-60min。
6）清洗：PBS清洗3次，2 min/次。
7）二抗：每张切片加一滴生物素标记抗小鼠二抗（需完全覆盖待检组织），孵育10min。
8）清洗：PBS清洗3次，2 min/次。
9）酶孵育：每张切片加一滴HRP标记链霉亲和素（需完全覆盖待检组织），孵育10分钟。
10）清洗：PBS清洗3次，2 min/次。
11）制备DAB显色液。
按照【20×DAB浓缩液：20×H2O2浓缩液：20×DAB底物缓冲液：水=1:1:1:20】的比例进行配制显色液，以1张切片为例，分别吸取上述3种溶液各2.5µl溶于50µl去离子水中，充分混匀即可。
【注】：
① DAB显色液需现配现用，避光放置，且在30min内使用。
② 可根据需要一次染多张切片，各种试剂量按照上述比例放大即可。
12）显色：向切片上滴加一滴上述DAB显色液，室温显色2-5min（此步可在显微镜下控制显色程度）。
13）自来水充分冲洗。
14）用合适复染剂复染，盐酸酒精分化。
15）继续后续脱水、透明、封片、镜检。

3结果判定：阳性结果处显处染棕黄或棕褐色。

储存条件：4℃，勿冷冻，有效期一年。


耐热逆转录酶II北京厂家现货