GL6-miR报告基因质粒 克隆与表达

名称：GL6-miR报告基因质粒 克隆与表达
品Pai：百奥莱博
产地：国产|进口
编号：YT444
规格：1μg
英文名：pGL6-miR Reporter gene plasmid
pGL6-miR报告基因质粒是一种用于microRNA(miRNA)等研究的萤光素酶报告基因质粒。该质粒可用于把目的基因的3’非翻译区(3’-untranslated region, 3’-UTR)或其它适当序列插入到其多克隆位点，然后在哺乳动物细胞中高灵敏度地检测特定microRNA(miRNA)或其它非编码RNA等对该基因3’-UTR或其它靶序列调控活性的报告基因质粒。

pGL6-miR以pGL6质粒为模板，具有氨苄青霉素抗性，并在萤火虫萤光素酶基因之后添加了多克隆位点，便于插入目的基因的3’-UTR或其它适当的靶序列。

pGL6-miR的主要工作原理是，把目的基因的3’非翻译区(3’-untranslated region, 3’-UTR)或其它适当序列插入到萤光素酶基因(luc2)的下游，转染细胞并检测萤光素酶的表达。如果细胞内源或外源表达的miRNA与靶序列结合，通常会YZ萤光素酶的翻译或促进mRNA的降解，从而使萤光素酶的表达量减少。因此通过本报告基因质粒检测萤光素酶的表达水平，可以检测内源或外源表达的miRNA是否对插入的靶序列有调控作用。并且可以通过靶序列中预测的miRNA结合位点的突变，用于比较突变前后萤光素酶表达水平的变化。如果预测的miRNA位点突变后，miRNA的调控作用消失，则基本上说明突变的位点就是miRNA在靶序列中具体的结合位点。

pGL6-miR带有中低等强度的PGK启动子，有利于检测miRNA等对于萤火虫萤光素酶表达水平的下调作用，即当miRNA的YZ作用较弱时也能检测到。并且PGK启动子可以在人、大鼠、小鼠甚至酵母细胞中都可以发挥作用。

pGL6-miR质粒的主要信息如下：

Base pairs	6097bp
Feature Nucleotide	Position
PGK promoter	20-538
luc2 reporter gene	549-2202
Multiple cloning region	2208-2261
SV40 late poly（A） sinal	2268-2512
SV40 early enhancer/promoter	2554-2972
Synthetic neomycin phosphotransferase(Neor)coding region	2998-3792
Synthetic poly(A) signal	3817-3865
Synthetic Beta-lactamase(Ampr) coding region	4980-5840
Synthetic poly(A) signal/transcriptional pause site	5945-6097

pGL6-miR质粒的图谱如下：


使用说明：
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2. 插入靶序列：在pGL6-miR多克隆位点选取适当的酶切位点，经酶切处理后连入目的基因的3’-UTR或其它适当的靶序列。
3. 以此质粒为模板构建的质粒可以用常规的细胞转染方法转染细胞。检测时可以采用萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(YT271)或双萤光素酶报告基因检测试剂盒（YT273）。

储存条件：-20℃。

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英文名称：Threonine Deaminase (Crude Enzyme)
规格：100ml|1L
本酶为大肠杆菌表达的苏氨酸脱氨酶，并经简单纯化获得的可以确保达到一定酶活力的粗酶液，用于催化苏氨酸脱氨，生成2-酮丁酸和氨。

CAS：9024-34-4
外观：半透明黄色溶液
酶促反应：
L-threonine = 2-oxobutanoate + NH3 (overall reaction) (1a) L-threonine = 2-aminobut-2-enoate + H2O
(1b) 2-aminobut-2-enoate = 2-iminobutanoate (spontaneous)
(1c) 2-iminobutanoate + H2O = 2-oxobutanoate + NH3 (spontaneous)
储存条件：-20℃，有效期1个月。

注意事项：
1. 由于本产品需新鲜制备，在您确认订购后约8个工作日才能发货。
2. 粗酶液的每次冻融均可能会引起部分失活，所以收到酶液后请根据需要进行分装，并置于-20℃或更低温度保存。
3. 随着保存时间的延长，酶活力会有一定程度的下降，收到产品后应尽快使用。
4. 本产品在生产和保存的过程中可能会有混浊或沉淀产生，融化后混匀即可，不影响正常使用。


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