Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒 细胞凋亡与增殖

名称：Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒 细胞凋亡与增殖
品Pai：百奥莱博
规格：20次|50次
编号：YT131
产地：国产|进口
本试剂盒是用FITC标记的重组人Annexin V来检测细胞凋亡时出现在细胞膜表面的磷脂酰丝氨酸的一种细胞凋亡检测试剂盒。可以使用流式细胞仪、荧光显微镜或其它荧光检测设备进行检测。一个包装的本试剂盒共可以检测20个细胞样品。

试剂盒组份：
Annexin V-FITC——————100µl
Annexin V-FITC结合液———12ml
碘化丙啶染色液——————220µl

Annexin是一类广泛分布于真核细胞细胞浆内钙离子依赖的磷脂结合蛋白，参与细胞内的信号转导。但仅Annexin V被报道可以调控一些PKC的活性。

Annexin V选择性结合磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine，简称PS)。磷脂酰丝氨酸主要分布在细胞膜内侧，即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期，不同类型的细胞都会把磷脂酰丝氨酸外翻到细胞表面，即细胞膜外侧。磷脂酰丝氨酸暴露到细胞表面后会促进凝血和炎症反应。而Annexin V和外翻到细胞表面的磷脂酰丝氨酸结合后可以阻断磷脂酰丝氨酸的促凝血和促炎症反应活性。

用带有绿色荧光的荧光探针FITC标记的Annexin V，即Annexin V-FITC，就可以用流式细胞仪或荧光显微镜非常简单而直接地检测到磷脂酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。

本试剂盒还提供了碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)染色液，碘化丙啶可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞，呈现红色荧光。对于坏死细胞，由于细胞膜的完整性已经丧失，Annexin V-FITC可以进入到细胞浆内，与位于细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸结合，从而也使坏死细胞呈现绿色荧光。

本试剂盒的流式检测效果参考图1和图2，荧光显微镜检测效果参考图3。


图1.细胞用本试剂盒染色后流式细胞仪检测细胞凋亡的效果图。Jurkat细胞未经处理(A)或用10μM喜树碱(Camptothecin)作用4小时(B)后，用本试剂盒染色，然后用流式细胞仪进行细胞的散射和荧光检测。从图中可以看出，经过凋亡诱导剂喜树碱处理后的细胞，其Annexin V-FITC染色阳性并且PI染色阴性的细胞，即凋亡细胞，明显增加(B图的右下象限)，Annexin V-FITC和PI染色双阳性的细胞，即坏死细胞，也有所增加(B图的右上象限)。图中Annexin V-FITC染色阴性PI染色阳性(Annexin V-/PI+)所在象限(A和B图的左上象限)出现的细胞点是许可范围内的检测误差。实测数据可能会因细胞类型、细胞凋亡情况、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。


图2.细胞用本试剂盒染色后流式细胞仪检测效果验证图。Jurkat细胞用10μM喜树碱(Camptothecin)作用4小时后，未经染色(A)、仅用本试剂盒中的PI进行染色(B)、仅用本试剂盒中的Annexin V-FITC进行染色(C)、用本试剂盒中的Annexin V-FITC和PI进行双染(D)。从图中可以看出，未经染色的是双阴性细胞(A)，仅PI染色后出现了预期的PI染色阳性的细胞，仅Annexin V-FITC染色出现了预期的Annexin V-FITC染色阳性的细胞，Annexin V-FITC和PI双染出现了预期的仅Annexin V-FITC染色阳性的凋亡细胞和双阳性的坏死细胞。出现的非预期的细胞点完全在许可的误差范围内。实测数据可能会因细胞类型、细胞凋亡情况、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

注意事项：
1. 如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
2. 染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
3. 如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
4. 荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
5. 用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。

储存条件：4℃避光，有效期6个月。

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英文名称：AP2 Probe For EMSA(10μM)
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本探针是用于EMSA(也称gel shift)研究的AP2 consensus oligonucleotide。这个双链寡核苷酸含有公认的AP2结合位点，可以用作EMSA研究时的探针。一个包装的探针可以进行约90个同位素标记探针的反应，每次标记的探针可以测定约100个样品；或约可以进行60个生物素标记探针反应。如果作为未标记的探针用于同位素标记探针的冷竞争(cold competition)，可以进行90-180个冷竞争反应。如果用于生物素标记探针的冷竞争时，可以进行约30个冷竞争反应。

AP2 consensus oligo的序列如下：
5＇-GAT CGA ACT GAC CGC CCG CGG CCC GT-3＇
3＇-CTA GCT TGA CTG GCG GGC GCC GGG CA-5＇

本EMSA探针可以使用T4 Polynucleotide Kinase在[γ-32P]ATP存在的情况下进行标记，也可以用于生物素标记。

注意事项：避免加热到40℃以上，温度过高会导致双链DNA探针解聚成单链。而单链无法用于EMSA研究。

储存条件：-20℃，有效期一年。


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