RFT185型四环素盐酸盐溶液(50mg/ml)优惠

名称：RFT185型四环素盐酸盐溶液(50mg/ml)优惠
编号：RFT185
规格：5×1ml
产地：国产|进口
英文名：Tetracycline HCl Solution
品Pai：百奥莱博
四环素类抗生素主要是与细菌核糖体30S亚单位的A位特异性结合，阻止tRNA在该位置上的联结，阻止肽链延伸，从而YZ细菌蛋白质合成。四环素类还可引起细胞膜通透性改变，使得重要成分外漏，从而YZ细菌生长繁殖。四环素盐酸盐的水溶性好，生物利用度比四环素碱好，故常用于临床及研究领域。四环素盐酸盐溶液由四环素盐酸盐溶于水组成，经0.22μm过滤CJ，可以直接添加到培养基中。一般工作浓度为10～50 μg/ml，其中严紧型质粒常采用10 μg/ml，松弛型质粒常采用50 μg/ml。

使用方法：
根据实验具体要求操作，一般四环素在LB中终浓度为10～50μg/ml。可以大体按照1/1000 LB体积加入50mg/ml Amp溶液，如100ml LB中加入100μl 四环素 50mg/ml。

注意事项：
1、尽注意无菌操作，避免污染。
2、避免反复冻融。
3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
4、镁离子是四环素的拮抗剂，四环素抗性菌的筛选应使用不含镁盐的培养基(如LB培养基)。

储存条件：-20℃，有效期6个月。

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·JM109化学感受态细胞
编号：RFT113
英文名称：JM109 Competent cell
规格：20×100μl
本公司生产的JM109感受态细胞采用经特殊工艺处理得到，可用于DNA的化学转化。使用pUC18质粒检测，转化效率可达108cfu/μg，-70℃保存几个月转化效率不发生改变。

基因型：endA1 recA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 (rk-,mk+) relA1 supE44 D (lac-proAB) [F′traD36 proAB laqI qZΔM15]

特点：用于蓝白斑筛选；recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。

操作方法：(以下操作均按无菌条件的标准进行)
1、取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中，置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。以下实验以100μl感受态细胞为例。
2、向感受态细胞悬液中加入目的DNA(50μl的感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和)，轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置30分钟。
3、将离心管置于42℃水浴中放置45秒，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却2-3分钟，该过程不要摇动离心管。
4、向每个离心管中加入500μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)， 混匀后置于37℃摇床振荡培养45分钟(150转/分钟)，目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
5、将离心管内容物混匀，吸取100μl已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基上，用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收，倒置平板，37℃培养12—16小时。
注意：涂布用量可根据具体实验来调整。如转化的DNA总量较多，可取更少量转化产物涂布平板；反之，如转化的DNA总量较少，可取200—300μl转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少，可通过离心(4,000 rpm, 2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板)

注意事项：
1、感受态细胞应保存在-70℃，不可多次冻融和放置时间过长，以避免感受态细胞的转化效率。
2、进行转化操作时，应根据相应温度及无菌条件的要求进行。
3、为防止转化实验不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，将损失降到。

储存条件：-70℃，有效期6个月。


RFT185型四环素盐酸盐溶液(50mg/ml)优惠