ECL化学发光法检测试剂盒(小鼠IgG) 蛋白质研究

名称：ECL化学发光法检测试剂盒(小鼠IgG) 蛋白质研究
编号：QN1158
产地：国产|进口
英文名：Western blotting(Mouse IgG)
品Pai：百奥莱博
规格：1盒
本试剂盒主要用于western blotting的化学发光显色，含有HRP标记抗小鼠IgG二抗。

SDS-PAGE电泳后，蛋白质按照分子量大小分离，转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)后，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶标记的第二抗体起反应，加入发光底物后，能让胶片感光。经显影和定影后，可以在胶片上显示出条带(抗原所在位置)。

试剂盒组分：
封闭试剂———————————30g(可配制400ml)
10倍浓缩抗体稀释液——————50ml
HRP标记小鼠IgG二抗——————0.3ml，效价1:500～1000
ECL显色液-——————————25mlA+25mlB

常规电泳转膜后:
1)清洗转印膜：将膜剥离下后，作好标记，一般在左上角剪一缺口。室温用TBS-T漂洗3次每次5min,以尽量洗去转印膜上的SDS，防止影响后面的抗体结合。
2)按5g封闭试剂加100ml双蒸水计，配制膜封闭液，配好的膜封闭液为乳白色悬液，将漂洗过的转印膜放入封闭液内，置摇床孵育，室温封闭30min。用TBS-T缓冲液(PH7.6)洗膜，室温漂洗3次每次5min。
3)将10×抗体稀释液用双蒸水稀释成1×(10ml,10×抗体稀释液加入90ml双蒸水，混匀，可4℃保存三个月)。此稀释液可作为一抗和二抗的稀释液。
4)用1×的抗体稀释液稀释一抗。根据用量以及一抗的推荐稀释浓度来稀释一抗。将杂交膜放入杂交袋中，加入一抗工作液，封口，4℃孵育过夜或37℃摇动孵育2h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。
注：如果所加一抗不同，可在此步将膜沿电泳方向剪成条，分别作好标记，分开孵育。
5)用TBS-T缓冲液(PH7.6)洗膜，室温漂洗3次每次5min。
6)用1×的抗体稀释液稀释二抗。根据用量，按10ml抗体稀释液加入15ul的HRP标记二抗的比例，配制二抗工作液。将杂交膜放入杂交袋中，加入二抗工作液，封口，37℃摇动孵育1h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。
7)用TBS-T缓冲液(PH7.6)洗膜，室温漂洗3次每次10min。
8)根据用量，取ECL发光液A、B等量混匀，加在膜正面，暗室显色1～5分种。倾去显色液，小心用纸吸去显色液，在上面盖一层平整的透明纸。再取出感光胶片，做好标记，轻轻的放在膜上，显色30秒到1分钟，取出胶片浸入显影液中，观察显色情况，再放入定影液中1分钟。根据条带强弱，再次感光时可减短或者加长感光时间(从5秒到30分钟)以期达到理想结果。
注意事项：
1.请根据一抗来源选择试剂盒。
2.可以根据显色结果来优化实验反应时间。如背景过深，可延长膜封闭时间，加长漂洗次数与时间。如果
条带过弱，可增加抗体浓度，可延长抗体孵育时间或加长感光时间。
3.TBS-T(0.01M，PH7.6)配制方法：称取NaCl 8.5g，Tris 1.21g，用800ml的双蒸水溶解，用盐酸调PH到7.6，再加入0.5ml Tween-20，用双蒸水加至1000ml，混匀即可。(也可按照自己的配制习惯来配制)

储存条件：-20℃避光，有效期一年。

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