高灵敏鱼4-羟基壬烯酸(4-HNE)ELISA试剂盒厂商价格实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中待测物质水平。用纯化的待测物质抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入待测物质,再与HRP标记的待测物质抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成的黄色
高灵敏鱼4-羟基壬烯酸(4-HNE)ELISA试剂盒厂商价格实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中待测物质水平。用纯化的待测物质抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入待测物质,再与HRP标记的待测物质抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成的黄色。颜色的深浅和样品中的待测物质呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中待测物质浓度。
ELISA试剂盒特点
1.将酶催化反应的放大作用和抗原抗体亲和反应的高度专一性、特异性相结合,以酶标记的抗原或抗体作为主要试剂进行免疫测试,所以具有很高的灵敏度。
2.实现了在细胞或亚细胞水平上示踪抗原或抗体的所在部位,或在微克、甚至纳克水平上对其进行定量。
3.其抗原抗体反应具有高度的特异性。
4.为浓缩液,配有稀释液,稀释后直接可用,无需另行配置。
ELISA试剂盒安全性:
1)避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
2)实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3)不要用嘴吸取ELISA试剂盒里的任何成份。
高灵敏鱼4-羟基壬烯酸(4-HNE)ELISA试剂盒厂商价格组成
1. 微孔板 (固相抗体) 96 well
2. 标记抗体 (30倍浓缩,HRP标记抗体) 0.4 ml
3. 标准品 0.5 ml × 2
4. EIA缓冲液 (1% BSA, 0.05% Tween-20 含有PBS) 30 ml
5. 标记抗体稀释液 (1% BSA, 0.05% Tween-20 含有PBS) 12 ml
6. 显色液 (TMB底物液) 15 ml
7. 终止液 (1N硫酸) 12 ml
8. 洗涤缓冲浓缩液 (40倍浓缩,0.05% Tween-20的磷酸缓冲液) 50 ml
ELISA试剂盒操作步骤
1.标准品的稀释:使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟。
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:在450nm波长处测定各孔的OD值。
高灵敏鱼4-羟基壬烯酸(4-HNE)ELISA试剂盒厂商价格的操作注意事项
1.试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
2.实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
3.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4.使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
5.使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6.洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7.加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
8.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
9.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
10.底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
高灵敏鱼4-羟基壬烯酸(4-HNE)ELISA试剂盒厂商价格的常见问题
问: 酶标板分次使用 剩下的建议怎么保持 ?
答:要是真的用不完或标本不多的情况下。做点处理后:板条和板架都是可拆卸的,可以再用之,前拆下4条放置锡箔袋或其他无污染的袋子,放到冰箱 2-8度保存。
问:酶标包被版是酶标板吗?
答:是的
问:96t可以检测多少个样本?48t可以检测多少个样本?
答:96t标准的可以检测85个样本,其他有10个标准品孔,1个空白对照
96t单孔可以检测90个样,7个标准品控 1个空白对照
48t标准的可以检测37个样本,其他有10个标准品孔,1个空白对照
48t单孔可以检测40个样本,其他有7个标准品孔,1个空白对照
问:那标准品出现跳孔是怎么回事?
答:你完全可以拿同样的标准品再重新做一次 ,做之前摇匀一下,肯定可以做好 。那是操作问题了 ,你可以再做一次的,之前也有客户出现过类似的问题 学生做了2次都没做好 后来老师自己做 就是摇匀了一下,其他操作都一样 标准曲线做的很。
问:建议标准做复吗?
答:标准品做复孔是Z好的
问:36个样品,定96T的,可以测一个重复吧
答:可以
问:Elisa方法的不测人血小板第四因子里IgG抗体的滴度吗?
答:Elisa不测滴度的,荧光法可以测
问:酶标板不平,影响结果吗。
答:不影响结果的。
问:样本稀释液可以用来直接稀释血清吗?
答:可以的,直接加40ul就可以了
高灵敏鱼4-羟基壬烯酸(4-HNE)ELISA试剂盒厂商价格计算
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
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