高灵敏鱼4-羟基壬烯酸（4-HNE）ELISA试剂盒说明书

建立标准曲线：设标准孔8孔，每孔中各加入样品稀释液100ul，孔加标准品100ul，混匀后用加样器吸出100ul，移至第二孔。如此反复作对倍稀释至第六孔，，从第六孔中吸出100ul弃去。第七孔为空白对照，第八孔为零孔。
加样：待测品孔每孔各加入待测样品100ul混匀。
将反应板充分混匀后粘上封板纸置37 oC 120分钟。
洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。
每孔（除零孔）加抗体工作液50ul，置37℃ 60分钟。
洗板：同前。
每孔（除零孔）加酶标抗体工作液100ul（两滴），将反应板置37 oC 60分钟。
洗板：同前。
每孔加入底物液A、B各一滴，置37 oC避光反应15分钟。
每孔加入1滴终止液混匀。
在450nm处测吸光值。
 
二、高灵敏鱼4-羟基壬烯酸（4-HNE）ELISA试剂盒说明书样品收集、处理及保存方法
1.血清－－－－-操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.血浆－－－－-EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3.细胞上清液－－-1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆－－－－-将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液
5.保存－－－－－－如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
 
三、高灵敏鱼4-羟基壬烯酸（4-HNE）ELISA试剂盒说明书操作注意事项： 
1.试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2.实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4.使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
5.使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6.洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7.底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8.加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
 
四、高灵敏鱼4-羟基壬烯酸（4-HNE）ELISA试剂盒说明书常见问题解答
问：测出来的标准曲线值前面几盒都是0.98 才正常，后面怎么0.93了？
答：某个点偏离大可以去掉，保留5个点
   
问：是不是空白对照就是什么都不加？
答：不加样本  不加样本稀释液  不加酶标试剂 其他都可以加、
 
问：样本稀释液是配好的吗？
答：样本稀释液是配好的
 
问：样本稀释液可以用来直接稀释血清吗？
答：可以的，直接加40ul就可以了
 
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