北京现货猪传染性胃肠炎病毒一步法RT-PCR诊断试剂盒优惠

名称：北京现货猪传染性胃肠炎病毒一步法RT-PCR诊断试剂盒优惠
产地：国产|进口
编号：DL096
规格：20次
品Pai：百奥莱博
【注意】接到货后请认真阅读注意事项。
【用途】用于猪传染性胃肠炎病毒病的检测、诊断和流行病学调查。
【试剂】     
编号 数量 保存
SR-I 8mL 4℃
SR-II 14mL 4℃
TU-1 250uL -20℃
TU-2 20uL -20℃
TU-3 20uL -20℃
TU-4 20uL -20℃
TU-5 500uL -20℃
TU-6 60uL -20℃
TU-7 25uL 4℃
TU-8 30uL 4℃
T 500 uL -20℃
【操作步骤】
1.RNA提取  
(1)取疑似猪传染性胃肠炎病毒病的病料（空肠、小肠及其内容物等），用Hank’s液或PBS研磨成1：3悬液，在－20 ℃反复冻融3次，经3 000 r/min离心5 分钟，上清液再经12 000 r/min离心15分钟，上清液－70 ℃保存备用。
(2)取200uL上清液（或标准品Ｔ），移入新的1.5mL灭菌EP管中，加入400uLSR-I，反复颠倒几次混匀，室温放置5~10分钟。
(3)加入200uL氯*(代＇仿＇)，漩涡振荡15秒混匀。室温下放置2~3分钟。
(4)12000r/min离心10分钟，取上层水相(注意：切勿吸取到里两相之间的杂质)，转移到一个新的EP管中，再加入等体积异丙醇混匀，室温放置10分钟。
(5)12000r/min离心10分钟，弃去上清，加入SR-II 700uL，充分洗涤沉淀RNA后，12000r/min离心5分钟，小心吸去上清（注意：严格防止RNA丢失）。
(6)用洁净吸水纸吸干管壁的SR-II，室温放置2~3分钟。用20uLTU-5溶解，即为模板，即用或-70℃冻存备用。
2.One-Step RT- PCR加样体系
TU-1 12.5uL
TU-2 1uL
TU-3 1uL
TU-4 1uL
模 板 9.5uL
3.反应程序
第1步 50℃ 45min
第2步
第3步 94℃预变性
94℃变性 5min
1min
第4步 58℃退火 1min 30个循环（3～5步）
第5步 72℃延伸 1min
第6步 72℃延伸 6min
第7步 4℃终止 5min
4.电泳
    称量0.25g琼脂糖，放入锥形瓶，加入25mL 1×TAE液（可配置50×浓缩液，储存备用），于微波炉中熔解，加入1.5uL的TU-8混匀。封闭好电泳槽，加入梳子，倒入琼脂凝胶，待凝固后，将PCR产物5uL混合1uL TU-7，加样于凝胶孔中，同时在相邻孔加3uLTU-6，在120v 电压下，1×TAE液中电泳15分钟，在紫外成像仪下观察结果。
【结果判定】
    在约1128bp位置出现扩增带，实验结果为阳性（如图）。                              
1.DL2000 Marker      
2.标准阳性片段
【注意事项】
1.每次使用，开盖之前请先瞬时离心，使试剂沉于管底。
2.本试剂盒为20头份量诊断试剂，操作失误或移液器不准确造成剂量不够情况，不予负责。
3.所有试剂在要求温度下保存，-20℃保存试剂尽量减少反复冻融，使用后的试剂立即放回，避免在室温搁置太久。
4.尽量建立PCR试验操作区，避免交叉污染，RNA抽提严格防止RNA酶污染，要求戴一次性塑料手套，并经常更换。
5.加样和反应程序严格按照说明书进行，由于操作失误、移液器不精确、定时不准确造成无结果情况，不予负责。
6. 枪头、离心管和PCR管在使用前，Z好用DEPC水（0.1%）处理，然后高压灭菌后烘干，操作过程尽量不要用手接触，可用镊子夹取。
7.注意防止试剂污染，在有效期限前用完。
8. TU-8所装试剂为致癌物质，避免接触到皮肤。如若不甚接触，请立即用洗涤剂清洗。
【有效期】
本制品有效期为1年，生产日期见包装侧面。

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·鸡传染性喉气管炎病毒PCR诊断试剂盒
编号：DL109
规格：20次
[注意]  用前请认真阅读注意事项。
[用途]  用于鸡传染性喉气管炎病毒的检测、诊断和流行病学调查。
[试剂]
编号 数量 保存
SR-I　　 1.2mL 室温
SR-II　　 65μl 　-20℃　
SR-Ⅲ　　 900μl 　4℃　
TU-1　　 110μl 　-20℃　
TU-2　　 80μl 　-20℃　
TU-3　　 22μl 　-20℃　
TU-4　　 22μl 　-20℃　
TU-5　　 1.0mL 　-20℃　
TU-6　　 10μl 　-20℃　
TU-7　　 30μl 　-20℃　
TU-8　　 60μl 　-20℃　
TU-9　　 30μl 　4℃　
T　　 1.0mL 　-20℃　
[操作步骤]　　
1. 病料处理：　　
   取适量病料鼻、气管、支气管和喉部等组织，于灭菌研钵充分研磨，用PBS液按照1：5稀释成均匀乳剂，　-20℃　反复冻融3次以上。
2 . DNA的抽提　　
(1) 取已冻融好的病料，8000r/min离心5min，取上清（或T，T为质控样品）447μl，加50μl SR-I和3μlSR-II，　50℃　水浴1-2h，并不时颠倒混匀一下。
(2) 加入等量酚：氯*(代＇仿＇)（1：1），漩涡振荡20秒，　4℃　，12000r/min，离心5min。
(3) 取上清，加入等量氯*(代＇仿＇)，振荡混匀，　4℃　，12000r/min，离心5min。
(4) 取400μl上清，加入800μl无水乙醇，再加40μl SR-III，混匀。　-20℃　放置30~120min，　4℃　、12000r/min，离心10min，小心弃上清，沉淀即为DNA。用75%乙醇（灭菌双蒸水配，每次加入500μl）洗涤2次，小心吸去75%乙醇，勿使DNA丢失，室温晾干或超净工作台风干15-25min，加入15μl TU-5溶解即为模板，即用或　-20℃　保存备用。
3.PCR操作　　
加样体系：(将下列试剂加入0.5mLPCR反应管中，Z好在冰浴条件下加样。
4.电泳：　　
    称量　0.25g　琼脂糖，放入锥形瓶，加入25mL 1×TAE液（可配置50×浓缩液，储存备用），于微波炉中熔解，加入1μl的TU-9混匀。封闭好电泳槽，加入梳子，倒入琼脂凝胶，待凝固后，将PCR产物6μl混合1.5μl TU-7，加样于凝胶孔中，同时在相邻孔加入3μl TU-8，在100V 电压下，1×TAE液中电泳15分钟，在紫外成像仪下观察结果。
[注意事项]　　
1. 每次使用，开盖之前请先瞬时离心，使试剂沉于管底。
2. 本试剂盒为20头份量试剂，操作失误或移液器不准确造成剂量不够情况，不予负责。
3. 所有试剂在要求温度下保存，　-20℃　保存试剂尽量减少反复冻融，使用后的试剂立即放回，避免在室温搁置太久。
4. 尽量建立PCR试验操作区，避免交叉污染。
5. 加样和反应程序严格按照说明书进行，由于操作失误、移液器不精确、定时不准确造成无结果情况，不予负责。
6. 吸头、离心管和PCR管在使用前，要高压灭菌，操作过程尽量不要用手接触到管内壁，可用镊子夹取。
7. 注意防止试剂污染，在有效期限前用完。
8. TU-9所装试剂为致癌物质，避免接触到皮肤。如若不甚接触，请立即用洗涤剂清洗。
[有效期]　　
本制品有效期为1年，生产日期见包装侧面。


北京现货猪传染性胃肠炎病毒一步法RT-PCR诊断试剂盒优惠