北京现货pfu DNA聚合酶促销

名称：北京现货pfu DNA聚合酶促销
产地：国产|进口
规格：100U|5×100U
编号：RFT101
品Pai：百奥莱博
高保真平末端DNA聚合酶
● 贮存
-20℃保存一年。
● 产品简介
pfu DNA Polymerase是嗜热古细菌来源的DNA聚合酶，该酶除具有5’-3’DNA聚合酶活性外，还具有很强的3’-5’外切酶活性，增强了PCR扩增的保真度。与Taq酶相比，pfu聚合酶热稳定性更好，更能忍耐较高的变性温度。Pfu的保真性是Taq DNA聚合酶的10-15倍。延伸速度为0.5kb/分钟。PCR产物3’端不带碱基A，为平滑末端，要通过平滑末端克隆法进行克隆。
● 产品组成（RTH3102-02）
pfu DNA Polymerase（2.5U/μl） 40μl
10×pfu PCR buffer（含Mg2＋） 1ml
● 活性定义
1单位(U) pfu DNA Polymerase活力定义为在74℃、30分钟内，以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。
● 酶贮存缓冲液
50 mM Tris-HCl (pH 8.0); 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50 mM KCl ; Stabilizers; 50% glycerol
● 适用范围
高保真的DNA*(代＇片＇)段的扩增、DNA*(代＇片＇)段的平滑化。
● 使用说明：1. 按照下表在0.2ml PCR管中制备反应体系：成分 20μl反应体系 50μl反应体系 终浓度
Template 0.04-0.2 μg 0.1-0.5 μg as you wish
Primer 1（10 μM） 0.4 μl 1 μl 0.2 μM
Primer 2（10μM） 0.4 μl 1 μl 0.2 μM
10×pfu PCR buffer(含Mg2+) 2 μl 5 μl 1×
dNTP Mixture(10 mM) 0.4 μl 1 μl 200 μM each
pfu (2.5 U/μl) 0.4 μl 1 μl 0.05U/μl
ddH2O up to 20 μl up to 50 μl -
注1：如果需要改变Mg2+浓度，根据下表调节
PCR反应体系中Mg2+终浓度 2 mM 2.5 mM 3 mM 4 mM
20μl反应体系中25 mM MgSO4加入量 0 μl 0.4 μl 0.8 μl 1.6 μl
50μl反应体系中25 mM MgSO4加入量 0 μl 1 μl 2 μl 4 μl
注2：配制反应液时，请加入pfu，因为本酶有很强的3’-5’外切酶活性，有可能降解引物。
2. 混匀后，离心快甩将反应液收集到管底。
3. PCR仪如果没有热盖加热的话，补加25μl矿物油。
4. PCR仪上执行以下程序：步骤 温度 时间 循环数
初始变性 94℃ 3-5 min 1
变性 94℃ 30 sec 25-40*
退火 50-60℃* 30 sec
延伸 72℃ 0.5kb/min*
延伸 72℃ 5 min 1
*注： PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定的反应条件（温度、时间等）。
● 注意事项
1. pfu 酶具有 3’-5’的外切酶活性，所以 pfu 酶扩增时延伸速度远比 Taq 酶低，应根据扩增产物的长度设置相应的延伸时间，一般情况下 pfu 酶的延伸速度为每分钟 0.5kb；同时 pfu 酶的 3’-5’的外切酶活性可能降解引物，所以应把pfu 酶到反应体系中，并立即进行 PCR 反应。
2. pfu 酶的热稳定性比 Taq 酶好，对于 GC 含量很高的模板，变性温度可以提高到98℃，对 pfu 酶的活性无影响。

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·Real Taq DNA聚合酶
编号：RFT102
规格：5×500U|5×2000U
● 储存条件:-20℃ 保存
● 浓 度: 5 U/ml
● 产品简介
Real Taq DNA Polymerase是从克隆有Thermu aquaticus DNA Polymerase基因的大肠杆菌经诱导表达后分离纯化的，其分子量为94 KD。具有5’-3’DNA聚合酶活性和5’-3’外切核酸酶活性，无3’-5’外切酶活性。在PCR反应中，Real Taq DNA Polymerase延伸速度为1-2 kb/分钟，产物3’端带A，可直接用TA载体克隆。
● 活性定义
1单位(U) Real Taq DNA Polymerase活力定义为在74℃、30分钟内，以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。
● 酶贮存缓冲液
20 mM Tris-HCl (pH 8.0);0.1 mMEDTA;1 mMDTT;100 mMKCl ; Stabilizers; 50% glycerol
● 10×Taq Buffer
200 mM Tris-HCl (pH 8.4);200 mMKCl;15 mMMgCl2; 其它成分。
● 适用范围
一般用于DNA*(代＇片＇)段的PCR扩增、DNA标记、引物延伸、序列测定、平末端加A等，产物可以直接用于T/A载体克隆。
● 反应举例：注意：以下举例为常规PCR反应系统，仅供参考。实际反应条件因模板、引物等的结构不同而各异，需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物长短等具体情况，设定反应条件。
以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段
1. 反应体系的建立：50 ml反应体系如下(可根据比例放大或缩小反应体系)：Template <1mg
Primer 1（10 mM） 1 ml
Primer 2（10 mM） 1 ml
10×Taq Buffer 5 ml
dNTP Mixture(10 mM) 1 ml
Taq (5 U/ml) 0.5 ml
ddH2O 补至 50 ml
2. PCR反应循环的设置：94℃ 3 min
94℃ 30 sec
55℃ 30 sec 30 cycles
72℃ 1 min
72℃ 5 min
3. 结果检测：反应结束后取5 ml反应产物，琼脂糖凝胶电泳检测。


北京现货pfu DNA聚合酶促销