北京百奥莱博专业生产供应RFT051型宽分子量蛋白Marker(10-200KD)多少钱,我公司销售全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:RFT051型宽分子量蛋白Marker(10-200KD)多少钱
规格:20次
品Pai:百奥莱博
产地:国产|进口
编号:RFT051
● 储存条件:-20℃保存,开封后有效期6个月。
● 产品简介:
本产品包含14种蛋白质混合物,分子量范围为10kD-200kD,经过SDS-PAGE电泳,用考马斯亮蓝染色后可以得到14条带,可以用来判断SDS-PAGE电泳后蛋白质的分子量。
● 使用说明:a 次收到该产品,室温融化后,彻底混匀,离心快甩将溶液完全收集到管底,根据需
要适量分装成小管,-20℃贮存,每次取一小管使用。
b 取出分装后的Marker,常温融化,轻柔彻底混匀,管底不能见沉淀物。
注:此Marker为即用型,用前不要高温处理!
c 上样量根据胶的厚度和梳子的宽度确定。一般说来,0.75mm×5mm(厚度×宽度)的加样孔上样5μl,其他规格梳子请适当调整上样量。
注:使用银染时,由于灵敏度高于考马斯亮蓝染色方法,可以适当降低Marker上样量。
d 电泳结束后,染色,观察结果。
电泳结果如出现带型缺失现象或样品聚集在分离胶上沿,可在Marker中加入终浓度为100mM的DTT后再上样。
RFT051型宽分子量蛋白Marker(10-200KD)多少钱正在火爆,除此之外,为您推荐下别产品:
·普通质粒小提试剂盒
编号:RFT029
规格:100次|200次
● 试剂盒内容及保存:试剂盒组成 100次 200次 贮存方式
RNase A 300 μl 600 μl -20℃
Lysis Dye 600μl 2×600μl 室温
溶液P1 30 ml 60 ml 室温
(加入RNase A后2-8℃保存)
溶液P2 30 ml 60 ml 室温
溶液P3 40 ml 80 ml 室温
漂洗液PW 25 ml 2×25 ml 室温
洗脱缓冲液EB 15 ml 15 ml 室温
质粒吸附柱CP 100个 200个 室温
收集管(2 ml) 100个 200个 室温
说明书 1份 1份
● 储存条件和效期:本试剂盒在室温(25℃左右)干燥条件下,可保存1年;更长时间的保存可置于2–8℃。2–8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,应在使用前置于37℃下溶解沉淀至溶液澄清后再使用。单独包装的RNase A 在-20℃可稳定保存1年以上。加入RNase A后的溶液P1应置于2–8℃保存,可稳定保存半年。
● 产品简介及使用说明:本试剂盒采用经典的碱裂解法裂解细菌,再通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合DNA的特性,可以从1–5ml大肠杆菌LB培养液中快速提取3–20μg纯净的高拷贝质粒DNA。提取的质粒可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接和转化等实验。然而,对质粒纯度要求更高的转染实验(要求无内毒素),此试剂盒不能达到要求。另外,尽管该试剂盒可以抽提较大的质粒(>10kb),但我们不推荐使用。如果一定要使用,请参考以下方法:加大菌体使用量(使用5–10 ml过夜培养物),同时按照比例增加P1、P2、P3的用量;洗脱缓冲液应在70℃预热,在吸附和洗脱时可以适当的延长时间,以增加提取效率,其它步骤相同。
● 产品特点:使用了Lysis Dye,菌体裂解是否完全一目了然。由于判断菌体裂解和中和是否彻底更主要取决于操作者的经验,所以我们增加了Lysis Dye(一种能使裂解/中和体系变换颜色的试剂)来帮助观察裂解/中和的程度。加入P1后,Lysis Dye使菌液变为浑浊的红色;加入P2后,Lysis Dye立即使溶液变为澄清的红色,裂解是否完全只要观察红色溶液是否澄清,如果红色非常均一,表明裂解充分;在完全裂解的体系中加入P3混匀后,体系立即变为黄色,任何红色的残留表明没有完全混匀或者中和不彻底。
● 准备工作:1 将试剂盒附带的RNase A全部加入到溶液P1中(如15ml P1中加入150μl RNase A),混匀后4℃贮存。
2 按照标签所示在漂洗液PW中加入无水乙醇,混匀后盖紧瓶盖后室温贮存备用。
3 每次使用前请检查溶液P2、溶液P3是否有沉淀生成,如果出现沉淀,37℃温浴至沉淀溶解后再使用。
● 使用Lysis Dye的标准操作步骤:如非指出,所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1.取1–5 ml过夜培养的菌液加入离心管中,10,000g 离心1分钟,尽量吸除上清。
注:菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中。
2.向菌体沉淀的离心管中加入250 μl溶液P1(请先检查是否已加入RNaseA)和5μl Lysis Dye,使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀,此时溶液为浑浊的红色。
注:如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解,导致提取量和纯度偏低。
3.加入250 μl溶液P2,温和地上下翻转6–8次使菌体充分裂解,此时溶液变为澄清的红色。
注:温和地混合,不要剧烈震荡,以免污染基因组DNA;所用时间不应超过5分钟 ,以免质粒受到破坏;红色溶液应该透明均一,如有浑浊红色颗粒,表明裂解不充分,会大大降低质粒提取效率。
4.加入350 μl溶液P3,立即温和地上下翻转,充分混匀,混匀充分的标志是溶液完全呈透明的黄色,如有可见红色,说明混匀不彻底。10,000g 离心10分钟。
注:P3加入后应立即混合,避免产生局部沉淀。
5.小心地将上清转移到吸附柱CP中(吸附柱放入收集管中),10,000g离心30–60秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP重新放回收集管中。
6.向吸附柱CP中加入700 μl漂洗液PW(请先检查是否已加入无水乙醇),10,000g 离心30–60秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP重新放回收集管中。
7.向吸附柱CP中加入500 μl漂洗液PW,10,000g 离心30–60秒,倒掉收集管中的废液。
8.将吸附柱CP重新放回收集管中,10,000g 离心2分钟。
注:此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,不可省略,因为漂洗液中乙醇的残留会影响后续实验(酶切,PCR等)。
9.将吸附柱CP置于一个干净的1.5ml离心管中,向吸附膜的ZY部位悬空滴加50–100 μl洗脱缓冲液EB,室温放置2分钟,10,000g离心2分钟将质粒溶液收集到离心管中,-20℃保存。
注:● 为了增加质粒的回收效率,可将得到的洗脱液重新加入离心吸附柱中,再次离心收集。
● 洗脱缓冲液体积不应少于50 μl,体积过小影响回收效率。
● 洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率。
●不使用Lysis Dye的标准操作步骤:如非指出,所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1.取1–5 ml过夜培养的菌液加入离心管中,10,000 g离心1分钟,尽量吸除上清。
注:菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中。
2.向菌体沉淀的离心管中加入250 μl溶液P1(请先检查是否已加入RNaseA),使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
注:如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解,导致提取量和纯度偏低。
3.加入250 μl溶液P2,温和地上下翻转6–8次使菌体充分裂解。
注:温和地混合,不要剧烈震荡,以免污染基因组DNA;所用时间不应超过5分钟,以免质粒受到破坏。
4.加入350 μl溶液P3,立即温和地上下翻转6–8次,充分混匀,此时会出现白色絮状沉淀。10,000g 离心10分钟。
注:P3加入后应立即混合,避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀,可再次离心后取上清。
5.小心地将上清转移到吸附柱CP中(吸附柱放入收集管中),10,000g 离心30–60秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP重新放回收集管中。
6.向吸附柱CP中加入700 μl漂洗液PW(请先检查是否已加入无水乙醇),10,000g 离心30–60秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP重新放回收集管中。
7 向吸附柱CP中加入500 μl漂洗液PW,10,000g 离心30–60秒,倒掉收集管中的废液。
8.将吸附柱CP置于收集管中,10,000g 离心2分钟。
注:此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,不可省略,因为漂洗液中乙醇的残留会影响后续实验(酶切,PCR等)。
9.将吸附柱CP置于一个干净的1.5ml离心管中,向吸附膜的ZY部位悬空滴加50–100 μl洗脱缓冲液EB,室温放置2分钟,10,000g离心2分钟将质粒溶液收集到离心管中,-20℃保存。
注:● 为了增加质粒的回收效率,可将得到的洗脱液重新加入离心吸附柱中,再次离心收集。
● 洗脱缓冲液体积不应少于50 μl,体积过小影响回收效率。
● 洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率。
RFT051型宽分子量蛋白Marker(10-200KD)多少钱
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