耐热型MMLV逆转录酶(H-)

 数量： 大量
保质期： 一年
保存条件： -20℃保存
规格： 1000U
本产品为点突变型M-MLV逆转录酶(RNase H 缺失)，是RNA 依赖的DNA 聚合酶，可用于长mRNA (>5kb) 为模板的cDNA 合成。RNase H 活性的缺失有利于其应用，因为在长孵育时间的时候，RNase H 会开始降解模板。缺失了RNase H 活性的逆转录酶为长cDNA 的制备及包含高比例全长cDNA 的文库制备提供了更好的选择。它具有下列特点：1. 温度稳定性，点突变产物的热稳定性可防止与二级结构相关的问题，增强了与模拟的亲和力。2. 聚合酶活性增强，本产品与缺失突变得到的M-MLV RT(Cat.# 130912) 相比，具有更高的cDNA 产率。3. 广泛的工作范围：提高了逆转录的性能，使得可以在更广泛的酶浓度和底物浓度的条件下工作。低温运输和-20℃保存、有效期一年。

1．感受态的制备

（1）耐热型MMLV逆转录酶(H-)接种单菌落于2ml LB培养液中，37℃过夜。

（2）取0.25ml过夜菌入25ml LB培养液中，37℃振摇4～6h至A590=0.4～0.6。

（3）倒入50ml管内，水浴10min，以2500～3000rpm离心5min，弃上清。

（4）缓慢加入75mmol/L预冷CaCl25ml悬浮菌体，冰浴20min，同上离心弃上清。

（5）缓慢加入75mmol/L预冷CaCl21.0ml轻轻混匀后分装在1.5ml Eppendorf管中，每管200μl，冰浴1～2h。

2．重组DNA的转化

（1）将3只Eppendorf管按下列转化项目作好标记：

（2）冰浴30min至1h。中间摇动3次，以防受体菌沉底。

（3）42℃90s。

（4）37℃水浴5min。

（5）耐热型MMLV逆转录酶(H-)加入无相应抗生素的Lb 200μl，混匀后，37℃水浴30～60min。

（6）分别取3组反应物各50μl在含相应抗生素的固体LB培养基平皿上涂布，室温下干燥，然后倒置于37℃温箱中培养过夜。 

基因工程:有目的的通过分子克隆技术，人为的操作改造基因，改变生物遗传性状的系列过程。

耐热型MMLV逆转录酶(H-)载体:能在连接酶的作用下和外源DNA 片段连接并运送DNA 分子进入受体细胞的DNA 分子。

转化:指质粒DNA 或以它为载体构建的重组DNA 导入细菌的过程。

感染:以噬菌体、粘性质粒和真核细胞病毒为载体的重组DNA 分子，在体外经过包装成具有感染能力的病毒或噬菌体颗粒，才能感染适当的细胞，并在细胞内扩增。

转导:指以噬菌体为载体，耐热型MMLV逆转录酶(H-)在细菌之间转移DNA 的过程，有时也指在真核细胞之间通过逆转录病毒转移和获得细胞DNA 的过程。

转染:指病毒或以它为载体构建的重组子导入真核细胞的过程。

 R0424-02RNAsafer Stabilizer Reagent(250ml)

R5465-01RNAsafer II Stabilizer Reagent(50ml)

R5465-02RNAsafer II Stabilizer Reagent(100ml)

SQ 总RNA提取试剂盒

R3053-001x108 Cells, 0.5g Tissue

R3053-051x109 Cells, 5g Tissue

R3053-406.7 x109 Cells, 40g Tissue

一步法RNA提取试剂盒：用传统三相分离法从动物组织/培养细胞中纯化总RNA

R6830-01RNA-Solv Reagent (100ml)

R6830-02RNA-Solv Reagent (200ml)

总RNA提取试剂盒：从1X107个真核细胞，100mg动物/植物组织中提取100ug总RNA

R6934-01Total RNA Kit II(50)

R6934-02Total RNA Kit II(200)