二、服务说明
服务流程
接受订单——合 成——纯 化——分 装——质 检——发 货——客户提供
目的蛋白信息或基因序列,质粒(也可以选择由金开瑞提供);
蛋白询价信息表(请点击下载ZX,下载蛋白询价信息表后详细填写)。
交付
纯化后蛋白纯品、表达菌株(收费);
蛋白表达结题报告,包括测序报告、实验条件、蛋白表达纯化检测结果。
金开瑞生物拥有成熟的酵母表达技术,有需要的客户可以qq联系我:3013422302。
三、服务周期及报价
服务名称 | 服务项目 | 服务内容 | 交付结果 | 服务周期 | 服务报价 |
酵母蛋白表达服务经济型套餐 | 1.原核克隆 | 基因的获得 | 核酸电泳图片 | 2周 | 请询价 |
PCR扩增产物酶切连接到合适的载体 |
转化DH5α |
重组质粒大量制备 |
线性化重组质粒 |
2.优化表达 | 电转化适宜的酵母宿主 | 酵母核酸电泳图 | 2-3周 | 请询价 |
从转化的平板上随机挑10株单菌落做PCR鉴定 |
3.表达及纯化 | 从PCR鉴定阳性菌落中选取一株做1L体系的放大表达 | 表达上清SDS-PAGE | 1-2周 | 请询价 |
发酵液上清处理及一步纯化 | 纯化产物SDS-PAGE |
及western blot |
纯化产物SDS-PAGE及western blot | 1L上清的纯化产物 |
酵母蛋白表达服务标准型套餐 | 1.原核克隆 | 基因的获得 | 核酸电泳图片 | 2周 | 请询价 |
PCR扩增产物酶切连接到合适的载体 |
转化DH5α |
重组质粒大量制备 |
线性化重组质粒 |
2.优化表达 | 电转化适宜的酵母宿主 | 酵母核酸电泳图 | 5-6周 | 请询价 |
用遗传霉素G418进行多拷贝子筛选 |
对多拷贝子克隆进行RCR鉴定 |
选取40株多拷贝子进行小量诱导表达 | 种子表达上清 |
SDS-PAGE图 |
3.表达及纯化 | 选取表达情况Z好的,根据客户需要放大表达 | 表达上清SDS-PAGE | 1-2周 | 请询价 |
发酵液上清处理及一步纯化 | 纯化产物SDS-PAGE |
及western blot |
纯化产物SDS-PAGE及western blot | 客户要求的蛋白表达量 |
专利的Biobrick技术用于酵母工业菌种改良优化 | 1.原核克隆 | 基因的获得 | 核酸电泳图片 | 2周 | 请询价 |
PCR扩增产物酶切连接到合适的载体 |
转化DH5α |
重组质粒大量制备 |
专利的Biobrick技术体外梯度构建多拷贝基因剂量 |
2.优化表达 | 线性化重组质粒 | 酵母核酸电泳图 | 5-6周 | 请询价 |
电转化适宜的酵母宿主 |
对多拷贝子克隆进行RCR鉴定 |
选取40株多拷贝子进行小量诱导表达 | 种子表达上清 |
SDS-PAGE图 |
3.表达及纯化 | 选取表达情况Z好的,根据客户需要放大表达 | 表达上清SDS-PAGE | 1-2周 | 请询价 |
发酵液上清处理及一步纯化 | 纯化产物SDS-PAGE |
及western blot |
纯化产物SDS-PAGE及western blot | 客户要求的蛋白表达量 |
四、案例展示
案例1:经济型套餐
以下是通过我平台自行改造的pPIC9K载体和GS115宿主系统成功表达一种酶的经济型套餐实例。自接到订单至成功表达只用了20个工作日,亲和层析一步纯化得到蛋白纯度在95%以上。

案例2:标准型套餐
以下是一个需要做优化表达的标准型订单服务,客户要求表达一种YY蛋白,做工艺放大,对表达量有一定的要求,客户自己做了大量的工作但是表达量一直提不上去,我们从上游开始做表达优化,用了50个工作日,用我平台自己改造的pPIC9K载体和KM71H宿主在2.5mg/ml的G418浓度下获得一株令客户满意的工艺放大种子。

Fig. C: Expression and secretion of pharmaceutical protein from P.pastoris.
Lane 1 :Expression level from customer.
Lane 2 :Expression level from Genecreate.
Lane 3 :Negative control.
Fig. D: Purification of the target pharmaceutical protein by SP-Sepharose.
案例3:工业菌株改良优化
以下是我平台成功完成的一个工业酶菌种对产量的优化提高工作,利用专利的Biobrick技术一共用了近60个工作日由单拷贝基因剂量构建到8拷贝的基因剂量,表达量由开始的0.5g/L的水平提高到2.4g/L的水平,提高了近5倍。

Fig. E: single copy gene expression of industrial enzyme from P.pastoris.
Fig. F: eight copy gene expression of industrial enzyme from P.pastoris.
备注:我们只提供抗HIS标签抗体用于表达产物的质控,客户要求用对应蛋白的抗体做western blot,则抗体由客户自行提供。
专利的Biobrick技术是集蛋白的GX表达和高活性于一体的新技术,以下是我们成功为一家知名公司开发的诊断试剂原料,经客户同意,我们公开下列数据:

备注:以上是利用化学发光平台开发的试剂盒过SFDA的panel结果:
其线性相关性如下:

如您对我们的酵母表达及其表达系统感兴趣或者需要技术支持,请您与我联系QQ:3013422302 ,或者浏览我们公司的网站http://www.genecreate.cn/,可以搜索到您想要的服务信息,武汉金开瑞生物有限公司期待和您的合作。