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在ELISA中引入生物素－亲和素系统可以提高检测的灵敏度，但如果使用不当，可使本底加深，反而得不偿失。生物素标记蛋白质如比例不合适，极易形成较高的阴性本底。从蛋清中提取的亲和素是一种碱性糖蛋白，可以通过静电作用吸附在聚苯乙烯上，也是造成BA-ELISA高本底的因素之一。从链球菌中提取的亲和素改善了这一非特异吸附现象。