东方体荧光探针法PCR试剂盒【检验原理】
本试剂盒采用探针法实时荧光 PCR 技术,设计一对东方体特异性引物,结合一条特异性探针,用荧光 PCR 技术对东方体的核酸进行体外扩增检测,用于临床上对病原学辅助诊断。
【储存条件及有效期】
-20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融少于 7 次,有效期 12 个月。
【适用仪器】
ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
说明:不同批号的试剂盒组分不可交互使用。
1.1 DNA 提取
1) 对上述处理好的标本加入等体积核酸提取液(固体标本加入50μL 核酸提取液), 100℃恒温处理 10min,13,000 rpm 离心 5min,取上清液转移至新的 1.5mL EP 管,-20℃保存;
2) DNA 的提取也可以采用上海晅科生物科技有限公司生产的DNA 提取试剂盒(离心柱提取法),请严格按照试剂盒说明书进行操作。
2. 检测方法的局限性
a. 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关;
b. 样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;
c. 阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;
d. 病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;
e. 不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;
f. 试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果;
g. 本检测结果仅供参考,如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。
1.1 结果判断
阳性:检测通道 Ct 值≤35.0,且曲线有明显的指数增长曲线。
可疑:检测通道 Ct 值>35.0,且出现典型扩增曲线的样本建议重复试验,重复试验结果出现 Ct 值≤35.0 和典型扩增曲线者为阳性,否则为阴性。
阴性:样本检测结果无 Ct 值且无明显的扩增曲线。
3. 质控标准
阴性质控品:无明显扩增曲线或无 Ct 值显示;
阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且 Ct 值≤32; 以上条件应同时满足,否则实验视为无效。
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