肠道病 霍乱弧菌胶体金快速检测卡

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广州健仑生物科技有限公司

霍乱是由霍乱弧菌所引起的。霍乱弧菌为革兰染色阴性，对干燥、日光、热、酸及一般消毒剂均敏感。霍乱弧菌产生致病性的是内毒素及外毒素。正常胃酸可杀死弧菌，当胃酸暂时低下时或入侵病毒菌数量增多时，未被胃酸杀死的弧菌进入小肠，在碱性肠液内迅速繁殖，并产生大量强烈的外毒素。这种外毒素具有ADP-核糖转移酶活性，进入细胞催化胞内的NAD+的ADP核糖基共价结合亚基上后，会使这种亚基不能将自身结合的GTP水解为GDP，从而使这种亚基处于持续活化状态，不断激活腺苷酸环化酶，致使小肠上皮细胞中的cAMP水平ZG，导致细胞大量钠离子和水持续外流。这种外毒素对小肠黏膜的作用引起肠液的大量分泌，其分泌量很大，超过肠管再吸收的能力，在临床上出现剧烈泻吐，严重脱水，致使血浆容量明显减少，体内盐分缺乏，血液浓缩，出现周围循环衰竭。由于剧烈泻吐，电解质丢失、缺钾缺钠、肌肉痉挛、酸中毒等甚至发生休克及急性肾衰竭。

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③ 结合(或标记)：边搅拌边将称取的荧光色素渐渐加入球蛋白溶液中，避免将荧光素粘于烧瓶壁(大约在5-10min内加完)，加完后，继续避光搅拌12h左右。结合期间应保持蛋白溶液于4°C左右。

④ 透析：结合完毕后，将标记的球蛋白溶液离心(2500r/min) 20min，除去其中少量的沉淀物，装入透析袋中，再置于烧杯中，用pH8.0缓冲盐水透析(0-4°C)过夜。

⑤ 过柱：取透析过夜的标记物，通过葡聚糖凝胶SephadexG-25或G-50柱，分离游离的荧光素，收集标记的荧光抗体进行鉴定。洗脱液：0.01mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.2)；过滤量：12ml标记蛋白液(过滤前未透析)；收集量：20ml(稀释1.7倍左右)。

2、Chadwick法

(1) 试剂和材料

抗体球蛋白溶液、异硫氰酸荧光素、3%重碳酸钠水溶液、0.01mol/L pH8.0 PBS、1%硫柳汞、离心机及离心管、烧杯（25ml）搅拌器、无菌吸管，无菌吸管及毛细滴管、烧杯（500ml）透析袋等。

(2) 方法及步骤

① 抗体准备：用0-4°C的pH8.0磷酸盐缓冲液将球蛋白溶液稀释至浓度为30-40mg/ml，置入25ml烧杯内，放于冰槽中。

② 荧光色素准备：按每毫克免疫球蛋白加入0.01mg荧光素，用3%重碳酸钠水溶液溶解。

③ 将准备的抗体与荧光色素溶液等量混合，充分搅匀，在0-4°C冰箱中结合(登革在磁力搅拌机上持续搅拌)18-24h。

④ 透析和柱层析：方法同Marsshall法。