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广州健仑生物科技有限公司
美国Novabios一直在研发快速诊断试剂,使人们能够在早期阶段诊断各种疾病。自1999年2月成立以来,Novabios蓬勃发展,现已发展成为体外诊断的领道者,他们的主要产品,如疟疾、登革热、黄热病、乙脑是世界的拳头产品。这些产品通过诸如世卫组织、儿童基金会、政府采购和海外分销商等国际组织向120多个国家供应。
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三、同源重组用载体的构建
从W?噬菌体扩增一个374 bp的片段(包括W?噬菌体阅读框wp39?wp40及其之间的序列和wp40的5’端序列)作为同源重组盒的5’端序列(序列见33 312–33 686位,GenBank accession number DQ289555)。一个383 bp的wp41区域片段(位于W?基因组的35 948–36 331 bp位5)作为同源重组盒的3’端序列。这两个片段克隆到luxAB表达盒两端,并加入抗性筛选标记Spc基因。
四、同源重组筛选W?::luxAB
将构建的同源重组载体电转化到含W?噬菌体的蜡样芽孢杆菌ATCC4342溶原菌,用含Spc的平板培养基筛选电转化后的重组菌株(重组菌株具有生物发光特性)。重组菌株接种于含Spc的液体BHI培养基,30℃培养18h。筛选发生了同源重组的W?::luxAB噬菌体,以用于建立炭疽芽孢杆菌的快速检测系统。
PP01噬菌体是由Morita等从猪粪便中分离到的裂解性噬菌体[1],对O157:H7菌株具有型特异性。Oda等[2]建立了利用GFP报告噬菌体快速检测EHEC O157的方法,GFP报告基因被整合到PP01噬菌体。PP01-GFP报告噬菌体检测方法具有快速、特异等优点,但与其它基于GFP的检测方法一样,需要高能光源来激发GFP(即需要荧光显微镜),这限制了该方法的实际应用。