蔗糖酶（sucrase）试剂盒说明书 蔗糖酶生化测试盒
微量法 100 管/48 样 正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义： 蔗糖酶（EC 3.2.1.26）是碳水化合物消化吸收的关键酶之一，能够水解蔗糖变成相应的单糖 而被机体吸收。蔗糖酶生化测试盒
测定原理： 本试剂盒采用 3.5－二硝基水杨酸法测定蔗糖酶催化产生的还原糖的含量，由此可得出蔗糖 酶水解速度。其原理是 3.5－二硝基水杨酸与还原糖共热被还原成棕红色的氨基化合物，在 一定范围内还原糖的量和反应液的颜色深度成正比。此法操作简便、迅速、杂质干扰较小。 所需的仪器和用品： 可见分光光度计/酶标仪、沸水浴、移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制： 提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存； 试剂一：液体 2mL×1 瓶，4℃保存； 试剂二：粉剂×1 支 ，4℃保存，用时加入 1mL 蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂 4℃保 存； 试剂三：液体 3mL×1 瓶，常温保存； 样品测定的准备： 按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 测定步骤： 1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 520nm，蒸馏水调零。 2、样本测定，（在 EP 管中依次加入下列试剂）： 置于 25℃准确水浴 10min 试剂三 30 30 混匀， 95℃水浴 5min 左右（盖紧，防止水分散失），冷却至室温 蒸馏水 210 210 混匀，取 200μL 至微量石英比色皿或 96 孔板中测定各管 520nm 吸光值，ΔA=A 测定-A 对照，每个测定管需设一个对照管。 蔗糖酶活力计算： a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下 1、标准条件下测定的回归方程为 y = 0.1296x -0.12；x 为标准品浓度（mg/mL），y 为吸光值。 2、按照蛋白浓度计算 单位定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化水解 1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。
